酶联免疫吸附测定法

酶联免疫吸附测定法（ELISA）

1. 定义 ...................................................... 3 2. 原理 ...................................................... 3

2.1 抗原抗体反应 ......................................... 3 2.2 免疫测定在临床检验中应用 ............................. 5 3. ELISA类型 ................................................. 5

3.1 双抗体夹心法测抗原： ................................. 6 3.2 双抗原夹心法测抗体 ................................... 6 3.3 间接法测抗体 ......................................... 7 3.4 竞争法测抗体 ......................................... 7 3.5 竞争性测抗原 ......................................... 8 3.6 捕获包被法测抗体 ..................................... 8 3.7 ABS-ELISA法 .......................................... 9 4. ELISA试剂组成 ............................................ 10

4.1 固相载体： .......................................... 10 4.2 包被方式 ............................................ 11 4.3 包被用抗原：天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。 ...... 11 4.4 包被条件： .......................................... 12 4.5 洗涤液： ............................................ 13 4.7 酶催化性； .......................................... 13

4.8 结合物制备 .......................................... 13 4.9 结合物保存 .......................................... 14 4.10 酶底物 ............................................. 15 4.11 酶反应终止液 ....................................... 15 4.12 参考标准品 ......................................... 16 4.13 加样： ............................................. 164.14 保温 ............................................... 174.15 保温方式： ......................................... 174.16 室温温育反应 ....................................... 174.17 洗涤 ............................................... 174.18 显色 ............................................... 184.19 比色 ............................................... 184.20 酶标比色仪 ......................................... 194.21 结果判定 ........................................... 194.22 定量测定 ........................................... 204.23 ELISA操作要点 ....................................... 21

1.

定义

酶联免疫吸附测定法（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），简称

ELISA，采用抗原和抗体特异反应将待测物和酶连接，然后通过酶和底物产生颜色反应，对受检物质进行定性或定量分析一种检测方法。

2.

原理

采用抗原和抗体特异反应将待测物和酶连接，然后通过酶和底物产生

颜色反应，可对受检物质定性或定量分析。

2.1 抗原抗体反应 2.1.1

可逆性

抗原和抗体结合形成抗原抗体复合物过程是一种动态平衡，其反应式

为：

Ag+Ab→Ag·Ab

抗体亲和力（affinity），可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]，Ag·Ab解离程度和K值有关。高亲和力抗体抗原结合点和抗原决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。解离后抗原和抗体均能保持原有结构和活性。

2.1.2

特异性

抗原抗体结合发生在抗原决定簇和抗体结合位点之间。化学结构和空

间构型互补关系，具有高度特异性。因此，在很多时候，测定某一特定物质不需分离待测物。

2.1.3

最适比例

只有当抗原抗体浓度比例是当时，才出现可见反应。