专题二 微生物的培养和应用
课题1微生物的实验室培养
【目标定位】
了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。
【自主预习】
一、培养基：
1．概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为 培养基和 培养基。
2．营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。
3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。
〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
来源二、无菌技术：
阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：
[来源:学# 1．对实验操作的 、操作者的 和 进行 。 2．将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。 3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。
4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。
(二)消毒和灭菌
1．消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。
2．灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？
〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？
〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？
〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止 。 三、实验操作----大肠杆菌的纯化培养：
本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。
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（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：
、 、 、 、 。
〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶
化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？
〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？
2． 倒平板：待培养基冷却至 ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：
①在火焰旁右手拿 ，左手 ； ②使锥形瓶的瓶口 ；
③左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板 。 〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
〖思考8〗平板倒置的目的是什么？
〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？
（二）纯化大肠杆菌
微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。
1．平板划线法是 的操作，将
聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 其操作步骤是：
①将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。
②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。 ③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。 ④将冷却的接种环伸入到 。 ⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。
⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。 ⑧将平板 培养。 〖思考10〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？
为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？
取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？ 最后灼烧接种环的目的是？
在作第二次以及其后的划线操作时为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
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2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度 ，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的 。 系列稀释操作：
①取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。 ②用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。 ③从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。
〖思考11〗系列稀释操作的注意事项是什么？
涂布平板操作：
⑴将 浸在盛有 的烧杯中。
⑵取少量 （不超过 ），滴加到培养基表面。
⑶将 的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却 。 ⑷用涂布器将菌液 地涂布在培养基的表面。涂布时可 ，使菌液分布均匀。
四、结果分析与评价
1．培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？
2．在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？
3．培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？
〖思考12〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？
〖思考13〗频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？
【随堂检测设计】
1．下列关于微生物营养的说法，正确的是
A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．凡是碳源都能提供能量 c．除水以外的无机物仅提供无机盐 D．无机氮源也能提供能量
2．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌
A．接种针、手、培养基 B．高压锅、手、接种针 C．培养基、手、接种针 D．接种针、手、高压锅 3．以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是 A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯 C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板
D．待平板冷却凝固约5～10 min后将平板倒过来放置
【拓展训练设计】
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1．下列有关培养基的叙述正确的是
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌 2.不同培养基的具体配方不同，但一般都含
A．碳源、磷酸盐和维生素 B．氮源和维生素
C．水、碳源、氮源和无机盐 D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 3．获得纯净培养物的关键是
A．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌
B．接种纯种细菌
C．适宜环境条件下培养 D．防止外来杂菌的入侵
4．下列常用的无菌操作中错误的是
A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源
C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭 5．有关倒平板的操作错误的是
A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 6．有关平板划线操作正确的是
A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 c．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
D．最后将平板倒置，放人培养箱中培养 7．有关稀释涂布平板法，叙述错误的是 A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释
B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面
C．再放在适宜条件下培养 D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落 8．涂布平板操作需要用到
A．接种环、滴管、酒精灯 B．接种环、移液管、酒精灯
C．涂布器、移液管、酒精灯 D．涂布器、接种环、酒精灯 9．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱的目的是
A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染 C．没必要放人未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用 10．菌种保藏应控制的条件是
（1）湿度 （2） 低温 （3） 干燥 （4） 有光 （5）隔绝空气 （6）适当有氧
A．（1）（4）（6） B．（2）（3）（6） C．（1）（5）（6） D．（2）（3）（5） 11．平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是
A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染
C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基
12．鉴定培养基的制作是否合格的方法是：将制备好的培养基放在 中保温1-2天看有无 ，如果没有 说明制作合格，反之则不合格。
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[来源:Zxxk.Com]
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