启动子文库工作菌液使用指南

产品编号: CAT：RY8006 产品概述：

本产品由长度为10 bp的启动子片段和pHIS2 （Smal-lineared）载体同源重组构建文库质粒，含有多个克隆位点和限制性内切酶，可用TF centered Y1H筛库，筛选与转录因子互作的核心位点。 载体信息：

保存条件：

-80℃~-70℃保存，运输条件：干冰。 产品质检参数：

文库库容量>1*108，重组率>95%，空载率<5%。 案例

实验流程:

用含有pHIS2-启动子质粒的酵母工作菌液制备感受态，将pGADT7-诱饵质粒DNA转入其中，涂相应的筛选平板。

1. 冰上融化启动子文库酵母工作菌液，接于液体SD-T培养基50 ml，30℃，225 rpm，振荡培养24 h。

2. 转接于YPDA液体500 ml，使初始OD600=0.2，30℃，225 rpm，振荡培养4-5 h，至OD600=0.6。 3.离心收菌，室温，4000 rpm，5 min。

4.用30 ml无菌水重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。 5.用20 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。 6.用10 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清。 7.向离心管中依次加入如下试剂，用枪头吹打混匀，或剧烈振荡1 min左右，至完全混匀。

50%PEG3350 1 M LiAc ssDNA (10 mg/ml) 诱饵质粒DNA

9.6 ml

8. 30℃水浴孵育，30 min。

1.44 ml

300 ul

25 ug

9. 42℃水浴热激，25 min。 10. 30℃水浴复苏1 h。

11.离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清，用6 ml无菌水重悬菌体，尽量温和地混匀，从中取20 ul培养物稀释后涂SD-TL平板，用于检测文库转化效率。其余涂相应的平板20块。

12. 30℃恒温培养3-7天，观察菌落生长。

13. 挑取长出的克隆单菌落，转接到相对应的筛选平板中继续培养3-5天。 注意事项

启动子文库酵母工作菌液避免反复冻融，使用时请在冰上解冻。 技术支持

南京瑞源生物技术有限公司坐落于南京市栖霞区生命科技园，专注于基因组高通量研究领域，致力于生物高科技研发，目前产品的技术水平已达到省级实验水平，瑞源生物立足于生命科学，为基础研究领域科学工作者提供生物学技术服务，自2019年创立以来，全体员工致力于利用酵母系统研发新药物靶点，专注于生物学研究，长期与全国各大农林/医药院

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