洁净区（室）沉降菌监测规程

威特药业 洁净区（室）沉降菌监测规程 编号：质量—QA操作—013—02 编制部门 质量保证部 分发部门 起草人/日期 质量保证部、生产技术部 审核人/日期 替换：质量—QA操作—013—01 批准人/日期 执行日期 页数：5页 1目的：建立洁净区（室）内沉降菌监测标准操作程序，保证药品在规定洁净级别内进行生产

2范围：洁净区（室）内沉降菌监测的全过程。 3职责：质量保证部、生产技术部相关人员。 4内容： 4.1程序：

4.1.1 质量保证室根据洁净区（室）的验证结果，建立洁净区（室）的日常监测计划，依剧计划和生产需要填写洁净区（室）环境监测通知（以下简称通知），经质量部负责人批准后，下发化验室和车间。

4.1.2化验室接通知后，与车间讨论确定具体监测时间，安排好监测工作，确保监测工作如期完成，如不能按期完成监测，应由室主任填写“分析/评价延迟报告书”，经质量部负责人批准后，予以重新安排

4.1.3监测前一日，车间做好清洁卫生工作并消毒。监测前，洁净区（室）内温度和相对湿度应与药品生产工艺相适应，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。无特殊要求时，温度应控制在18～26℃内，相对湿度应控制在45～65%内，空气洁净度等级不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净区（室）与室外大气的静压差应大于10Pa，D级洁净区（室）换气次数应≥15次/时。 4.2培养皿的制备：

4.2.1将培养皿在121℃湿热灭菌30分钟或者180℃干热灭菌2小时。配制培养基并灭菌，将灭菌培养基加热熔化，冷至45～60℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿15~20ml，待培养基凝固后，将培养基平皿倒置于30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

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洁净区（室）沉降菌监测规程 质量—QA操作—013—01

4.3采样点的确定：

4.3.1根据洁净区（室）面积大小确定最少采样点数目（根据国家标准GB/T16294-1996要求），在满足最少采样点数目的同时，还宜同时满足最少培养皿数。采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面），可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。

4.3.2最少采样点数目：可按表1确定。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。

表1 最少采样点数目

面积(m2) ＜10 ≥10～＜20 ≥20～＜40 ≥40～＜100 ≥100～＜200 A级 2～3 4 8 16 40 洁净度级别 C级 2 2 2 4 10 D级 2 2 2 2 3 注：表中的面积对于单向流洁净室是指送风面积，对于非单向流洁净室是指房间面积。

表2 最少培养皿数

洁净度级别 A级 C级 D级 4.4.采样：

4.4.1.采样前洁净区的状态：

4.4.1.1监测当日，非单向流洁净区（室），测试应在净化空气系统正常运行不少于30分钟上。单向流区域测试应在净化空气系统正常运行不少于10分钟以上

4.4.1.2监测人员穿戴符合洁净级别的工作服，室内监测人员不得多于二人，非监测人员不得进入洁净区。

4.4.1.3一般采用静态测试，必要时进行动态测试。静态测试指在洁净区（室）清洁卫生工作已完成，净化系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净区（室）内

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所需Φ90mm培养皿数（以沉降0.5小时计） 14 2 2 洁净区（室）沉降菌监测规程 质量—QA操作—013—01

无生产人员的情况下进行测试。动态测试指在洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。 4.4.2采样布置：

4.4.2.1将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。 4.5培养：

4.5.1全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。在30～35℃培养，时间不少于48小时。每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。。 4.6 菌落计数和结果分析：

4.6.1达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，并用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。 4.6.2将测得的数据进行计算，计算公式如下

平均菌落数M=（M1+M2+? +Mn）/n

式中：M1=1号培养皿菌落数

M2=2号培养皿菌落数 Mn=n号培养皿菌落数

n=培养皿总数

4.6.3监测完毕，填写有关的记录，交化验室主任签名，由质量保证部作出环境评价结果。 4.7注意事项

4.7.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.7.2防止人为对样本的污染。

4.7.3采样时应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除 4.7.4一般采用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，应注意培养皿边缘生长的菌落，并注意菌落与培养基沉淀物的区别。

4.7.5试点及采样次数均应在测试开始前确定，防止在测试过程中随意改变测试点及改变采样次数。

4.7.6无人生产时，洁净厂房在各处都应达到要求；有人生产时，产品暴露的周围均应达到要求。

4.7.7若生产环境测试结果不符合要求时，不得进行生产和检验工作，应对环境重新

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洁净区（室）沉降菌监测规程 质量—QA操作—013—01

进行灭菌、清洁和净化，经检测合格后方可开始工作。

4.7.8 根据验证结果我厂D级区域沉降菌一般每3个月检测一次，C级区域沉降菌一般每个月检测一次，A级区域沉降菌一般每星期检测一次。

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质量—QC记录—009—01

沉降菌测试记录

测试部门 测试状态 测试温度 静压差 洁净级别 测试日期 培养基配制： 取营养琼脂培养基 g于 ml蒸馏水中，加热至溶解，分装，于 ℃ 分钟高压灭菌，备用。 培养基平皿的制备： 将培养皿放入专用不锈钢桶内，盖好不锈钢盖子，在电热恒温干燥箱内 ℃灭菌 小时，备用。将灭菌培养基加热溶化，冷至 ℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约 ml，待琼脂凝固后，将培养平皿倒置于 ℃恒温培养箱中培养 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。 静态 测试依据 测试地点 相对湿度 培养基 污染限度 报告日期 洁净区沉降菌监测规程 采样的方法： 在空调净化系统正常运行 分钟后，在洁净区（室）内没有生产人员的情况下，穿戴好符合洁净级别要求的工作服，进入洁净区（不得多于二人）进行测试。根据洁净区（室）面积大小确定最少采样点数目，在满足最少采样数目的同时，满足最少培养皿数。采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。将培养基表面暴露 分钟后，收集培养皿，将培养皿倒置于恒温培养箱中， ℃培养 小时。 沉降菌的计数： 达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记，并用放大镜检查是否有遗漏，计算。 检测人： 复核人：

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