20ml即可致死。也可将福尔马林与酒精按一定比例配成动物致死液应用。 皮下注射士的宁致死：豚鼠剂量为3.0-4.4mg/kg体重，兔0.5-0.5mg/kg体重，狗0.3-0.42mg/kg体重，猫1.0-2.0mg/kg体重。 经口或注射DDT致死；（LD50）：豚鼠：经口0.4g/kg体重，皮下0.9g/kg体重。兔：经口0.3g/kg体重，皮下0.25g/kg体重；静脉0.043g/kg体重。狗：静脉0.067g/kg体重。
第三章 离体实验
实验一 离体平滑肌α-抗交感活性测定
【目的】 观察各种药物对去甲肾上腺素引起血管平滑肌收缩作用降低
的程度。
【材料】
动物：Pirbring White豚鼠，雌雄均可，体重400±10g。 仪器：器官槽，水平换能器，等张换能器，手术器械。
药物：Krebs－Henseleit缓冲液，10-9-10-5mol/L去甲肾上腺素，待测药 物。
【操作步骤】
将动物击晕放血处死，迅速取下肺动脉或胸主动脉，切成宽1－2mm，长15－20mm的螺旋条，固定在器官槽中，血管条前负荷1g。槽内营养液为含11.5mol/L葡萄糖的Krebs－Henseleit缓冲液，恒温37°C，通入95％O2 ，5%CO2气体。连接等张换能器（测定等长收缩力）或水平换能器（测定血管条长度变化）。平衡60 min，稳定之后开始实验，依次加入10-9-10-5mol/L 去甲肾上腺素，观察血管收缩功能，当达到强弱一致的收缩坪值时，开始加入待测药物(可连续给药)，至该药物的最大效应。
【结果】
1、测定给药前后血管的收缩力。
2、以NA引起的收缩力为100％，计算药物的抑制率。
3、从单个剂量效应曲线上测定IC50值。IC50表示对去甲肾上腺素引起收缩产生50％舒张效应时对应药物剂量。
【注意事项】
1、 若加入代测药物后，血管舒张活性不明显，可加入酚妥拉明（1×
10 -7 mol/L）,以测定血管标本的敏感性。
2、 如果化合物具有血管舒张活性，则增加去甲肾上腺素的浓度以逆
转血管舒张活性。
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3、 Krebs－Henseleit缓冲液组分(mmol/L)：NaCl 118，KCl 4.7， CaCl 2 2.5，KH2PO4 1.2，NaHCO3 25，MgSO4 1.2和葡萄糖11.5，pH 7.4。
实验二
药物的血管舒张活性测定
【目的】 1、学习制备去内皮细胞血管螺旋条的方法。
2、观察各种药物对血管舒张活性的影响。
【材料】
动物：Pirbring White豚鼠 雌雄均可，体重400±10g或体重为250－400g的SD大鼠。
仪器：器官槽，杠杆换能器，手术器械。
药物：PSSⅠ溶液， 去甲肾上腺素（NA）,乙酰胆碱（ach）， 待测药物.
【方法】
将动物击晕放血处死，迅速取下肺动脉或胸主动脉，室温下浸入PSSⅠ溶液。并切成环，温和摩擦内膜表面去除内皮细胞，螺旋切成宽1－2mm，长15－20mm的条，固定在含有20ml PSSⅠ溶液并通入95％O2 ，5%CO2气体的器官槽内，血管条负荷380mg， 37°C恒温。张力换能器等张记录血管长度的变化。
加药前测试内皮功能完整性，在浴槽内加入ACh，观察血管条瞬时舒张。
平衡60 min，稳定之后开始实验，加收缩剂使血管条收缩。当达到强弱一致的收缩坪值时，开始加入浓度固定的待测药物，每次给药间隔1h或在前一剂量效应已达稳定水平时，连续给药至该药物的最大效应，得到量效曲线。
为避免NO对实验结果产生影响，可在给待测药前15－30min，加入亚甲蓝或氧合血红蛋白（10 μmol/L）,选择性地阻断NO引起的舒张。
【结果】
1、计算舒张的X±S.E.M,第一次加入被测化合物前的收缩高度为
100%.
2、从单个剂量效应曲线上测定IC50值。IC50表示对激动剂引起收缩产生50％舒张效应的药物剂量。
【注意事项】
1、 加药前测试内皮功能完整性，在浴槽内加入ACh，观察血管条瞬
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时舒张。
2、 给待测药前15－30min，加入亚甲蓝或氧合血红蛋白（10 μmol/L）,选择性地阻断NO引起的舒张。
3、PSSⅠ液组分(mmol/L)：KCl 5.0，CaCl 2 1.2，KH2PO4 1．2，NaHCO3 25，MgSO4 0.56和葡萄糖12.0。
实验三 离体Langendorff心脏灌流法
【目的】 学习制备Langendorff离体心脏灌流模型并观察药物对血流动力学的影响。 【材料】
动物：大鼠或豚鼠
仪器：心脏灌流装置，手术器械 药物：K-H液 待测药物
【方法】
备妥立体心脏灌流装置及K-H液后，取动物击晕头部，迅速开胸暴露心脏,迅速剪下带2. 5～3. 0mm长主动脉的心脏(通常带小部分肺组织) ,浸入预先准备好的4 ℃含氧的K-H 液中,冲洗2 次排空心脏内残留的血液，并剪去多余肺组织,然后移到盛4 ℃生理盐水或K－H 液平皿中(液面盖过心脏) ,用两小镊子夹住主动脉开口逆行插入(1～1. 5mm) Langendorff 插管,结扎固定。剪去左心耳,将球囊导管插入左心室,经导管注入生理盐水,连接压力换能器输入四道生理记录仪，记录LVP、LVEDP、HR,最后将上述电信号输入微分放大器记录±dp/dtmax。
稳定20－30min后，先记录一段正常指标，然后经心脏套管侧支管道注入药物，也可用含有一定药物浓度的灌流液进行灌流，观察有关指标变化。
Krebs－Henseleit缓冲液（K－H 液）组分(mmol/L)：NaCl 118，KCl 4．7，CaCl 2 2．5，KH2PO4 1．2，NaHCO3 25，MgSO4 1．2和葡萄糖11．0，充分通入95 %O2及5 %CO2 混合气,衡定温度37 ℃、pH7. 3。
【结果】
待测药物对LVP、LVEDP、HR、±dp/dtmax的影响。
【注意事项】
1、摘取心脏速度要快，仔细，应排空心脏内淤血。
2、向主动脉插入心脏套管时不宜过深，以防损伤主动脉瓣及堵塞冠状动脉入口。
3、豚鼠和大鼠的药前灌流量以5－8ml/min为宜。灌流液要保持充足的氧气和37℃的温度。
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第四章 整体实验
实验四 毁脊髓大鼠的血压测定
【目的】制备毁脊髓大鼠模型，评价药物对心血管系统的作用 【材料】
动物：SD大鼠，♂，250－350g
仪器：手术器械、钢质探针、小动物呼吸机、动脉插管 药物：乌拉坦、待测药物
【方法】
取SD大鼠，乌拉坦腹腔麻醉（0.65g/kg）。浅麻醉后，背位固定。左颈总动脉插管供监测血压和采血。此外，气管与右颈外静脉分别插管。将一直径2.2mm，长约11cm的钢质探针通过眼眶和枕骨大孔沿椎管插入脊管全长刺毁脊髓。通过气管切开术的小管，用一部小型动物换气泵给动物换气。换气泵（Harvard Apparatus model 680）空气入口处接一T－型接头，通入氧气流，使动物吸入富氧空气。动物换气频率为每分钟60次。潮气量为100g体重2ml。刺毁脊髓30min后，自颈动脉插管采血0.3ml，立即分析O2分压、CO2分压和pH值，并用自动血气分析仪测定碳酸氢盐浓度。通过改变换气泵冲程体积，将各项指标调整到如下水平：pCO230~43mmHg, pH7.36~7.50, pO287~105mmHg。通过左颈总动脉连续记录血压和心率。
为测定对α1和α2受体拮抗作用，通过静脉注射剂量0.1~30μg/kg的苯肾上腺素（选择性α1受体激动剂）和剂量1~1000μg/kg的BHT920（选择性α2受体激动剂），记录首次剂量－效应曲线。被测药物静脉给药，15min后重复测定激动剂剂量－效应曲线。
【结果】
绘出量效曲线。如果激动剂使血压效应曲线改变，剂量效应曲线可采用对数作图处理并计算效力比。
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实验五 在体心肌梗死模型
【目的】制备急性心肌梗死模型并观察药物的影响。 【材料】
动物：SD大鼠，♂，250－350g
仪器：手术器械、小动物呼吸机、动脉插管 药物：乌拉坦、待测药物 【方法】
1．制备模型
选用250~300g的SD雄性大鼠。乌拉坦腹腔麻醉（0.65g/kg）浅麻醉后，背位固定。用大半个橡皮球（大小正好套住大鼠头颈部）连接到人工呼吸机，进行人工呼吸。胸部去毛、消毒、沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，在第四或第五肋间钝性分离肌层，打开胸腔，剪开心包，轻压右侧胸廓，挤出心脏。在动脉圆锥与左心耳之间冠状静脉处结扎左冠状动脉后，把心脏放回胸腔。迅速缝合胸壁。停止人工呼吸。进行给药观察。
2．梗死范围测量
1）将实验后心脏取下，用盐水冲洗，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌组织，用吸水纸吸去水分，称全心湿重。
2）沿冠状沟切除心房，留下心室，称重。顺房室沟从心尖心基部平行将心室切成0.1cm厚的心肌片，用生理盐水冲洗干净。
3）将心肌片放在1%的TTC溶液(pH7.4~7.8的0.2mol/L Tris配制)中，在37℃5~7min染色。染色过程中不时摇动或搅拌染色液使之与心肌有充分的接触机会。
4）染色后立即用水冲洗去多余的染料。梗死区不着色，非梗死区被TTC染为红色。
5）剪去各心肌片被染色的非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以全心重或心室生即分别得到梗死范围或占心室重的%。
【结果评价】
观察药物对梗死范围的影响。
【注意事项】
由于大鼠心脏表面见到的是静脉，结扎后如未出现明显的心肌梗死心电图波形，应弃去不用。
实验六 心室内压测定
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