流式细胞仪操作规程SOP

结果 此图为CD45圈门 如果做绝对计数，则 填 写 选中ｃeｌl/ｕl即可

活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定

方法 流式细胞仪(ＢeckmanＣoulter,贝克曼库尔特) 原理： 双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤(和固定)等步骤后，在流式细胞仪上进行分析,从而得到相应各亚群的百分数。活化淋巴细胞表面抗原为CD３＋/CD25+和CＤ3+／HＬA-DR+。ＣD３+/ＣD４５ＲO＋是记忆型T细胞。CＤ3+/CD4５ＲＡ+是纯真型T细胞。 标本采集与处理 受检者的准备 检查对象生活饮食处于日常状态。 采集部位 静脉采血 抗凝剂 ＥDTA或肝素抗凝血 要求 1.样本量1ml。 2.样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。 ３．样本白细胞计数应在4．0－10．0×1０9/Ｌ之间。若>10.0９×10/L， 样本需要稀释，用ＰBＳ稀释;若＜4.0×10９/Ｌ,应分离单个核细胞。 试剂 品牌 剂型 规格 贮存 贝克曼库尔特 成分 1:单克隆抗体 液体 ２—8℃ (ＣD3／HLA－DＲ Ｎｏ.ＩＭ1295 CＤ25-PＣ５ No.ＩM264６ CD3－FIＴC Ｎo.ＩM１281 CＤ45ＲA-PE No.IM18３4 CD45RO-ＰE Ｎo.ＩM13０7 CD4-PC5 No.IＭ2６３6 ） 2:全血溶血试剂（Q-Prｅｐ) 液体(No.７546９46) A:甲酸 液体 ７0ML 室温 B：碳酸钠等 液体 32ML 室温 C:多聚甲醛 液体 1４ML 室温 (Optｉlyse C No.IM1４0１) 液体 室温 3:鞘液(No．85４68５９) 液体 20Ｌ 室温 4：清洗液(No.８5４６９30) 液体 5L 室温 5:荧光微球（No.6605359) 液体 1０ML 2-8℃(Floｗ－Checｋ)