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________________之间。
(4)由图解可以看出，限制酶的作用特点是__________________ ______________________________________________________。 (5)如果甲中G碱基发生基因突变，可能发生的情况是________ _____________________________________________________。
解析：(1)由题图看出，甲和乙代表由脱氧核苷酸构成的不同的DNA片段。(2)EcoRⅠ和
HpaⅠ能切割DNA分子，说明它们是限制酶。(3)甲中切点在G、A之间，切口在识别序列中
轴线两侧，形成黏性末端；乙中切点在A、T之间，切口在识别序列中轴线处，形成平末端。(4)限制酶能识别DNA分子的特定核苷酸序列，并从特定位点切割DNA分子。(5)当特定核苷酸序列变化后，就不能被相应限制酶识别。
答案：(1)有特定脱氧核苷酸序列的DNA片段 (2)两种不同的限制酶
(3)黏性末端 平末端 G、A A、T
(4)能识别双链DNA分子的特定脱氧核苷酸序列，并从特定的位点将DNA分子切开 (5)限制酶不能识别切割位点
7．限制酶MunⅠ和限制酶EcoR Ⅰ的识别序列及切割位点分别是—CTTAAG—和—G
↓
↓
AATTC—。如下图表示的是四种质粒和目的基因，其中箭头所指部位为酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适于作为图示目的基因载体的质粒是( )
解析：目的基因两侧有MunⅠ和EcoR Ⅰ两种限制酶的识别序列，用这两种酶切割都可得到目的基因；B中质粒无标记基因，不符合作为载体的条件；C、D中的标记基因都会被破坏。
答案：A
8．下图表示某种质粒和人的胰岛素基因，其中a表示标记基因，b表示胰岛素基因，E1表示某限制酶的酶切位点，现用该种限制酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，下列选项中不可能出现的是( )
金戈铁制卷
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解析：根据目的基因和质粒上的限制性核酸内切酶的切割位点及相互连接情况判断不可能出现选项C的连接。
答案：C
9．据图所示，有关工具酶功能的叙述错误的是( )
A．限制酶可以切断a处 B．DNA聚合酶可以连接a处 C．解旋酶可以使b处解开 D．DNA连接酶可以连接c处
解析：限制酶切割DNA分子时破坏的是DNA链中的磷酸二酯键，如图a处。DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键，因此DNA聚合酶可以连接a处。解旋酶解开两个碱基对之间的氢键，即b处解开。DNA连接酶连接的是两个相邻的脱氧核苷酸的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键，如a处，而图示的c处连接的是同一个脱氧核苷酸内的磷酸和脱氧核糖。
答案：D
10．基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—GATC—。根据下图判断下列操作正确的是( )
↓
↓
A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割
C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
解析：解此题要明确目的基因要切下，质粒只要切开。限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—
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GATC—，单独使用时可以把目的基因和质粒都切断；限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G
↓
GATCC—，只能把它们切开，单独使用时不能切下，所以目的基因用限制酶Ⅱ切割，质粒用限制酶Ⅰ切割；因为用限制酶Ⅰ切割质粒时破坏了GeneⅡ，所以只能用Gene Ⅰ作为标记基因。
答案：D
11．根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。 (2)质粒载体用限制酶X(识别的序列由6个核苷酸组成)切割后产生的片段如下：
AATTC……G G……CTTAA
该酶识别的序列为__________________，切割的部位是________________。
(3)为使切割后的载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用限制酶X切割外，还可用限制酶Y切割，两种酶共同的特点是
______________________________________________________。
(4)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶，其中后者只能连接一种末端。
(5)基因工程中除质粒外，______________和____________也可作为载体。
解析：(1)限制酶切割DNA分子后可产生两种类型的末端，即平末端和黏性末端。(2)将图中片段两端的黏性末端对接后可以看出限制酶X识别的序列为6个核苷酸组成的—GAATTC—，互补链是—CTTAAG—，切割的位点为G和A之间的磷酸二酯键。(3)质粒载体可以用限制酶X切割，也可以用另一种限制酶切割，说明该酶与限制酶X切割产生的黏性末端相同。(4)基因工程使用的DNA连接酶，按来源可分为E·coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶，其中只能连接黏性末端的是E·coli DNA连接酶。(5)基因工程的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒。
答案：(1)黏性末端 平末端
(2)—GAATTC—或—CTTAAG— G和A之间的磷酸二酯键 (3)两种限制酶切割后形成的黏性末端相同 (4)T4 E·coli
(5)λ噬菌体的衍生物 动植物病毒
12．如图为某基因工程中利用的质粒简图，小箭头所指分别为限制酶EcoR I、BamH I的酶切位点，amp为青霉素(抗生素)抗性基因，tet为四环素(抗生素)抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoR I、BamH I在内的多种酶的酶切位点。
R
R
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据图回答下列问题：
(1)在基因工程中常用的工具有三种：一是用于切割DNA分子的________；二是将目的基因与载体拼接的________；三是作为载体的质粒。
(2)将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的载体(质粒)进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“________________”“________________”“____________________”三种，其中有效的(所需要的)重组DNA是________________。因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
(3)利用图示的质粒拼接形成的三种拼接产物(重组DNA)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物(重组DNA)是_____________________。
解析：(1)在基因工程中常用的工具酶有两种：一是用于切割DNA分子的限制酶，二是将目的基因与载体连接的DNA连接酶。(2)用同一种限制酶将含有目的基因的DNA和质粒分别切开，产生的黏性末端相同，进行拼接形成的重组DNA，理论上讲，可能有目的基因—目的基因、目的基因—载体和载体—载体三种。其中人们所需要的重组DNA是目的基因—载体。(3)由图可以看出两种限制酶的酶切位点都在四环素抗性基因中，两种限制酶都能破坏四环素抗性基因，因此用该质粒拼接形成的三种拼接产物(重组DNA)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物应是载体—载体(仍有抗性基因)。
答案：(1)限制酶(限制性核酸内切酶) DNA连接酶
(2)目的基因—目的基因 目的基因—载体 载体—载体 目的基因—载体 (3)载体—载体
13．如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。
金戈铁制卷
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