紫外可见分光光度法绘制Fe标准曲线

泸州医学院公共卫生实验教学中心

《卫生化学》实验报告

专业 预防医学 班级 1班 姓名 杨秀程 第 2 次实验 实验日期 2013 年 4 月 1 日 地点 实验室 指导教师 谢老师 实验题目： 紫外可见分光光度法绘制Fe标准曲线 预习情况：

一、实验目的与要求：

掌握紫外可见分光光度法分析条件选择的方法； 熟悉紫外可见分光光度计的使用方法； 了解用邻二氮菲测定微量Fe的原理。

二、实验原理：

邻二氮菲是测定微量Fe的一种优良显色剂。在pH=3-9的溶液中，邻二氮菲

与二价Fe作用生成橙红色配合物，其lg K=21.3,最大吸收波长为510nm,摩尔吸光系数为1.1×10^4.在一定范围内，二价Fe的浓度与吸光度符合比尔定律。

三、仪器与试剂

1.仪器与器皿 紫外分光光度计，25ml容量瓶，胶头滴管，1ml移液管

2.试剂 1.000×10^-3mol/L铁标准溶液，1.5g/L邻二氮菲,100g/L盐酸羟胺溶液，1mol/L醋酸钠溶液，去离子水。

四、实验步骤：

1.配液 取6个25ml容量瓶，分别加人0.00，0.20,0.40,0.60,0.80,1.00 1.000×10^-3mol/L铁标准溶液, 0.5ml100g/L盐酸羟胺溶液,摇匀后，再分别加入1.00ml 1.5g/L邻二氮菲,2.50ml 1mol/L醋酸钠溶液,用去离子水定容至刻度，摇匀。

2.吸收曲线绘制

用最大浓度配置的溶液到入吸收池，在分光光度计上从波长440nm到560nm每隔5nm测量一次吸光度，在最大吸收波长附近每隔2nm测量一次吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。从曲线上找出最大吸收波长。

3.标准曲线绘制

以试剂空白为参比溶液，在选定的最大吸收波长下测量各溶液的吸光度。绘制出标准曲线，求出线性回归方程和相关系数。

五、实验数据及结果：

最大吸收波长：λmax=509.75

标准曲线：

回归曲线方程：Y=87.14458X+0.0199 R=0.99927

六、讨论：

紫外可见依然需要分为两步，先是光谱测定，确定最大吸收波长，然后再是光度的测定，在实验中不仅要规范操作，更要谨慎，这样才能保证R的值！