实验6 土壤过氧化氢酶活性的测定

实验6 土壤过氧化氢酶活性的测定

1 原理：

土壤过氧化氢酶能酶促过氧化氢分解生成水和氧气，而过氧化氢本身在紫外波长240nm处有强烈吸收。通过加入定量的过氧化氢与土壤作用一段时间后，利用紫外分光光度法测定与剩余过氧化氢的量，加入量与剩余量之差即为与酶反应的量，用一定时间内消耗的过氧化氢量表示土壤过氧化氢酶的活性。 2 试剂

2.1 0.3%的过氧化氢溶液：将30%的过氧化氢用水稀释100倍即可。此溶液的准确浓度需用标准高锰酸钾溶液标定。

2.2 1.5M硫酸溶液：吸取83.3 mL浓硫酸入约200 mL水中，然后定容至1L。 2.3 饱和铝钾矾溶液：称取5.9g K2SO4·Al2(SO4)3(在0、10、20、30、40℃时的溶解度分别为3.00、3.99、5.9、8.39、11.7)于100 mL中，加热溶解后放冷至室温。 3 操作步骤 3.1 样品处理

称取风干土样2.00g于100mL三角瓶中，加入40mL水和5mL0.3%的过氧化氢溶液，放在震荡机振荡20分钟，取下立即加入1mL饱和铝钾矾溶液，过滤入装有5mL1.5M的硫酸溶液的三角瓶中，近干后，将滤液直接在240nm处测定吸光度。另取40mL水，加5mL过氧化氢溶液、加1mL铝钾矾和5mL硫酸溶液做无土对照。同时做无基质对照，即称取2.00g风干土，加入45mL水，同样振荡20分钟后，过滤于盛有5mL硫酸的容器中。 3.2 标准曲线

吸取0.3%的过氧化氢溶液0、1、2、3、4、5mL于50mL比色管或容量瓶中，加入5mL硫酸溶液，用水定容至刻度，加入1mL铝钾矾，摇匀后在240 nm测定吸光度。 4 结果计算

土壤过氧化氢酶活性(mg H2O2 g-1min-1)?

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