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32. (9分)酸奶是以牛奶为原料，经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌，经发酵制成。家庭自制酸奶的安全隐患是有害菌污染问题，为检测自制酸奶是否被杂菌污染，进行如图所示操作。回答下列问题。
(1) 制备牛肉膏蛋白胨培养基，倒平板待其冷却后将平板倒置的主要原因是________。
(2) 取最终的牛奶稀释液0.1 mL滴在培养基上进行涂布，涂布前要将涂布器________才能涂布。如果培养基上出现________的菌落，说明自制酸奶已被杂菌污染。
(3) 在恒温培养箱中培养一段时间后，3个平板上菌落数分别为65个、63个、64个，则可以推测酸奶中每毫升含菌数为________个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是________。
(4) 已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，进一步分离纯化乳酸菌的方法是________，该操作中常使用的接种工具是________。若培养后获得的某个平板，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成第一条线上无菌落的可能操作失误有________、________。
33. (8分)如图所示为A、B、C三种质粒和一个含目的基因D的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。图中EcoR Ⅰ、Pvu Ⅰ为两种限制酶，质粒上限制酶括号内的数字表示限制酶切割位点与复制原点的距离。回答下列问题。
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(1) 图中三种质粒中不能作为目的基因运载体的是________，理由是________、________。
(2) 在基因工程的操作过程中，需要检查目的基因是否重组到质粒中，应使用________酶切重组质粒，完全酶切后，进行电泳检测。若电泳图谱中出现长度为1.1kb和5.6 kb，或者________kb和________kb的片段，则可判断该重组质粒已与目的基因重组成功。
(3) 为研究目的基因D的功能，研究人员用下图所示的引物组合分别扩增D基因的D1片段、D3片段(DNA复制子链的延伸方向5′→3′)。
注：引物Ⅱ、Ⅲ上的x，y片段分别与N基因两端互补配对
①用引物Ⅰ、Ⅱ组合扩增后，得到的绝大部分DNA片段是下图中的________。
a
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b
c
d
②将大量N基因片段与扩增得到的D1片段、D3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是________(填“D1－N”或“D1－D3一N”或“D3－N”或“D1－N—D3”)。
2020届高三年级第三次模拟考试(三)(苏北三市)
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生物参考答案
一、 单选择
1. B 2. A 3. D 4. B 5. C 6. D 7. B 8. C 9. D 10. D 11. D 12. A 13. C 14. D 15. A 16. B 17. B 18. C 19. D 20. C
二、 多项选择题
21. AD 22. ABC 23. CD 24. BC 25. ACD 三、 非选择题 26. (8分)
(1) 外 糖蛋白位于膜外侧
(2) 需要载体 消耗能量 协助扩散 (3) ①
(4) 细胞膜上载体蛋白的数量 Na＋的吸收量(膜内外Na＋浓度梯度) 27. (8分)
(1) 下降 高温影响酶的活性 气孔关闭影响CO2吸收 (2) 7d内 3d内 (3) ①空间结构 流动 ②减少自由基的产生与积累 28. (8分)
(1) 质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液(1∶1) 洗去过多的解离液，防止解离过度 (2) 视野选择不当或取材不当
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