Real-time_PCR(从原理到实验方法及数据分析)

基线

阈值Ct值

[DNA]0

什么是基线？

基线就是扩增曲线中的水平部分。

线性图谱对数图谱

基线

阈值

Ct值

[DNA]0

什么是阈值？

1. 基线（空白）信号的产生是由于测量的偶然误差引起的。2. 偶然误差的结果满足对数分布。

3. 阈值= 基线（背景）信号标准偏差x 10。

4. 由于测量的偶然误差而导致测得的荧光信号大于阈值的概率小于10－5。

5. 当荧光信号大于阈值时，可以肯定是由于PCR的扩增使得荧光强度得以测量。

基线阈值

Ct值

[DNA]0

什么是CT值？

从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数

线性图谱

对数图谱

CT值

CT值

为什么CT值∝[DNA]0 ？

N = N0

nx (1+e)

N：产物分子数；N0：起始分子数

e：扩增效率；n:循环次数

PCR理论方程只在指数期成立lg[DNA]线性期n指数期y = x(1+e)循环数

为什么CT值∝[DNA]0 ？

Rn= RB+ X0(1+ e)n Rs

第n次PCR循环时的荧光信号强度(Rn)等于背景信号强度(RB)加上每个分子的荧光强度(即单位荧光强度，RS)与分子数目的乘积。

设n=CT，则：RCT= RB+ X0(1+ e)CT Rs

lg(RCT -RB) = lgX0 + CT lg(1+ e) + lgRsCT lg(1+ e) = -lgX0 + lg(RCT -RB) –lgRs

logXOlog(RT?RB)?logRS

CT=?+

log(1+EX)log(1+EX)

即CT = -k lgX0+ b

（线性方程）