草履虫的系列实验

草履虫的系列实验

纪星宇（2012302630004）

一、目的与内容

1.学习原生动物的采集、单克隆培养和鉴种

2.探究原生动物的应激性，理解原生动物应激性的原始性 3.观察原生动物的无性生殖过程和规律

4.观察草履虫食物泡的变化，研究食物泡中的PH变化 5.比较原生动物和后生动物组织细胞对刺激反应的异同 6.学习常用试剂的配制和使用

*7.了解原生动物有性生殖的方式和决定因素，研究接合生殖前后大核系的变化 内容：草履虫的采集与鉴种

草履虫横二分裂的观察 草履虫食物泡的观察 草履虫趋性的实质

后生动物激素对原生动物的影响 常用生物学试剂对原生动物的作用 草履虫相对接合型的鉴定 光线对接合生殖的影响

草履虫接合生殖前后接合型的变化

二、材料与用品

新鲜稻草、烧杯、滤纸、酒精灯、玻璃棒、过滤漏斗、玻璃导管、广口瓶、标签纸、台灯、表面皿、

微吸管、试管、PH试纸、镜台尺、载玻片、盖玻片、培养皿、离心机、棉球、恒温箱、托盘天平、量筒、温度计、中性红纯乙醇溶液、2%秋水仙素溶液、1%乙醚溶液、0.02%詹纳斯绿B染液、20%丙酮溶液、碳酸氢钠、蒸馏水、0.01%肾上腺素、0.01%胰岛素、碘液

三、操作与观察

（一）草履虫的采集与鉴种

1.配制稻草培养液

取新鲜稻草（注意清洗以除去肥料和农药）10g和碳酸氢钠1g，加入1L 清水于烧杯中

煮沸10~15min，直至液体成为清亮的黄褐色。趁热过滤后煮沸10min，在烧杯上蒙上双层洁净纱布，保温在20~30℃，培养3d 直至液面出现灰白色薄膜。通入充足空气备用。

2.采集自然水体中的草履虫

在水流缓慢，有机质丰富的水体中取带有微小白色浮渣的自然水。取池塘、下水道、

水田、湖沼各一处，分别采水250ml（注意水样不要混入泥沙渣滓，运输时不要封口）。依次编号为A、B、C、D。水面上20cm处施加垂直光照24h。

3.草履虫的单克隆培养

在表面皿中放适量蒸馏水，在体视显微镜下吸取单个草履虫（可利用其趋电性分离以

便操作），分别加入不同的表面皿中。每个水样取九只草履虫。确认吸取的为单个虫体后，再次吸取虫体加入到10ml稻草培养液中，将试管分别依次编号为1、2、3等（如A水样首

个虫体培养试管编号为A1，第二个编号为A2）。注意每次操作后立即清洗滴管再继续操作（后同）。将试管保温25℃ 培养7d 直至肉眼可见大量虫体，注意保持培养液的水质，每2d更换一半培养液（从底部吸取一半培养液后添加一半新鲜培养液，注意无菌操作），稳定PH在7.0-7.2。

4.草履虫的鉴种

分别吸取各试管中的草履虫，碘液染色后于显微镜下测量观察，将所得结果填入附表

一，并以此判断草履虫的种，把结果填入表中。

（二）草履虫横二分裂的观察

取分裂旺盛的草履虫培养液暗室培养3d。在载玻片上滴一小滴稻草培养液，从草履虫

培养液中取单个虫体于其中独立暗室培养（注意保湿）。用体视显微镜每隔0.5h镜检一次，连续观察24h，以观察两次连续的横二裂。注意子代草履虫是否同时进行第二次分裂。

（三）草履虫食物泡的观察

将中性红纯乙醇染液加入不同PH的溶液中，观察其颜色变化。制作草履虫临时装片，滴

加一滴中性红纯乙醇染液后盖上盖玻片在高倍镜下连续观察食物泡，每5min记录一次颜色变化，连续观察40min。把实验现象填入附表二。

（四）草履虫趋性的实质（电场，电流还是电化学？定向还是趋向？） （五）后生动物激素对原生动物的影响

分别取等量蒸馏水、0.01%胰岛素、0.01%肾上腺素于三张载玻片上，分别滴加等量草履虫培养液一滴，立即盖上盖玻片，在高倍镜下观察虫体运动和胞质流动情况。将实验结果填入附表五。

（六）常用生物学试剂对原生动物的作用

分别取等量草履虫培养液五滴于五张载玻片上，分别滴加一滴蒸馏水、2%秋水仙素、

1%乙醚、0.02%詹纳斯绿B、20%丙酮，立即盖上盖玻片，在高倍镜下观察虫体变化。将实验结果填入附表五。

（七）草履虫相对接合型的鉴定 1.扩大克隆培养

取十二株同种的草履虫的纯系培养液（均不足12株则将最多的种全部使用）转入已加入足量稻草培养液的试管内，塞上棉球并编号，22℃恒温培养7d。

2.富集草履虫

分别取各纯系培养液于对应编号的离心管内，500rpm离心3min，去上清液；加入蒸

馏水，重复离心，去上清液。再加入极少量蒸馏水以获得草履虫纯系浓集液。若草履虫在克隆培养时繁殖旺盛，则可直接吸取含密集虫体的表层培养液进行后续试验。

3.混合草履虫纯系浓集液

取等量草履虫纯系浓集液，分别两两混合于小表面皿中并编号为“某×某”，恒温22℃培

养。若直接取草履虫培养液混合，则混合后加入等量的蒸馏水再进行培养。培养时可使用湿房保湿（后同）。

4.观察接合生殖

混合培养两小时后起，每隔2h在体视显微镜下观察表面皿中的虫体。观察到许多虫

体相互粘连时，说明该混合液对应的两株草履虫即为相对接合型。此时转为每隔1h观察一次继续观察并记录现象。把结果填入附表六。

（八）光线对接合生殖的影响

取一对相对接合型的纯系草履虫浓集液等量混合，均分为三份后分别置于强光、弱光和

避光条件中培养，每隔1h观察一次，记录开始接合的时间，填入附表七。

*（九）草履虫接合生殖前后接合型的变化

四、分析与讨论

总结实验要点，分析讨论实验现象，完成实验报告。

五、参考资料

黄诗笺等，动物生物学实验指导，第2版，北京：高等教育出版社，2006 周燕等，草履虫的采集、培养及实验探究，贵州：黔西南民族师范高等专科学校 郭祖宝，介绍几种配制草履虫培养液的材料，山东：潍坊学院生物工程学院 汪花菊，草履虫的培养及探究其对某些物质的反应

老克列夫兰等，动物学大全，北京：科学出版社，1998

六、附注与附表

附注一：我国草履虫常见种类的特征

1.尾草履虫，长180-280μm，后端圆锥形，锥顶角度约45~60°。两个伸缩泡均有

收集管。有小核一个，致密型，椭圆形。

2.双小核草履虫长80-170μm，形似尾草履虫，但后部较前部更宽，后端锥形，顶

角近90°。有伸缩泡两个，收集管较短。有两个小核，很小，泡型。

3.多小核草履虫长180-310μm，形似尾草履虫，有时有三个伸缩泡。小核泡型，有

3-12个。

4.绿草履虫体长80-150μm。细胞质内有绿藻共生，在见光处培养后通体呈绿色。

小核一个，致密型。

附注二：实验装置设计 1.湿房的制作

在培养皿中放入适当大小的 附表一：草履虫采样与观察记录

采水点 虫体编号 U形玻璃棒，并加入少量蒸馏水即为湿房。使用

时将培养皿置于玻璃棒架上，盖上培养皿盖，注意透气。

A. B. C. D. 草履虫1 草履虫2 草履虫3 草履虫4 草履虫5 草履虫6 草履虫7 草履虫8 草履虫9 格式：“采水点：鉴湖，2012.11.11,10:30，底层水，见光”，“体长约180μm，大草履虫”或“待鉴定” 附表二：食物泡颜色的变化

时间 颜色种类 0min 5min 10min 15min 20min 25min 30min 35min 40min PH范围 附表三：草履虫对电刺激的反应

附表四：草履虫对光刺激的反应 附表五：不同药剂对草履虫的作用 0.01%肾上腺素 0.01%胰岛素 2%秋水仙素 1%乙醚 0.02%詹纳斯绿B 20%丙酮 附表六：草履虫相对接合型的鉴定

6 5 4 3 2 1 2 11 3 10 4 9 5 8 7 8 9 10 11 12 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 6 附表七：光对草履虫接合生殖的影响

光条件 接合对出现用时/h 强光照 弱光照 无光照 附表八：接合生殖中接合型的变化规律