15.(2014·山东卷.40) 人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下： （1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。
（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。 16.(2014·海南卷.31)[生物—选修3：现代生物科技专题]（15分） 下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。 请据图回答：
⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在＿＿＿＿酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在＿＿＿＿作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的＿＿＿＿序列，推测出响应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的＿＿＿＿序列，再通过化学方法合成所需基因。
⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有＿＿＿＿、＿＿＿＿、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为＿＿＿＿。 ⑷在基因工程中，常用Ca2＋处理D，其目的是＿＿＿＿。
17.(2014·北京卷.30)（16分）拟南芥的A基因位于1号染色体上，影响减数分裂时染色体交换频
率，a基因无此功能；B基因位于5号染色体上，使来自同一个花粉母细胞的4个花粉粒分离，b基因无此功能。用植株甲(AaBB)和植株乙（AAbb）作为亲本进行杂交实验，在F2中获得所需植株丙（aabb）。 （1）花粉母细胞减数分裂时，联会形成的________经________染色体分离、姐妹染色单体分开，最终复制后的遗传物质被平均分配到4个花粉粒细胞中。
（2）a基因是通过T-DNA插入到A基因中获得的，用PCR 法确定T-DNA插入位置时，应从图1中选择的引物组合是__________。
（3）就上述两对等位基因而言，F1中有______中基因型的植株。F2中表现型为花粉粒不分离的植株所占比例应为_________________。 （4）杂交前，乙的1号染色体上整合了荧光蛋白基因C、R。两代后，丙获得C、R基因(图2)。带有C、R基因花粉粒能分别呈现蓝色、红色荧光。
①丙获得C、R基因是由于它 的亲代中的____________在减数分裂形成配子时发生了染色体交换。
②丙的花粉母细胞进行减数分裂时，若染色体在C和R基因位点间只发生一次交换，则
产生的4个花粉粒呈现出的颜色分别是_____________________________________________。
③本实验选用b基因纯合突变体是因为：利用花粉粒不分离的性状，便于判断染色体在在C和R基因位点
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间____________，进而计算出交换频率。通过比较丙和_______的交换频率，可确定A基因的功能。 18.(2014·上海卷.67-71)（九）回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。（9分）
pIJ702是一种常用质粒（图20），其中tsr为刘链丝菌素（一种抗生素）抗性基因；mel是黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶ClaI、BglⅡ、PstⅠ、SacⅠ、SphⅠ在PIJ702上分别只有一处识别序列。
67.质粒DNA分子中的两条链靠______键维系成双链结构。 68 以SacI和SphI切取的目的基因置换PIJ702上
0.4kb(1kb=1000对碱基)的SacI/SphI片段，构成重组质粒pZHZ8。上述两种质粒的限制酶酶切片段长度列在表4中。因此判断目的基因内部是否含有BglⅡ切割位点，并说明判断依据________。
69.已知PIJ702上含mel基因的ClaⅠ/PstⅠ区域长度为2.5kb，若用ClaⅠ和PstⅠ联合酶切pZHZ8，则参照表数据可断定酶切产物中最小片段的长度为______kb。
70. 不含质粒的链霉菌在含硫链丝菌素固体培养基上的生长状况如表5所示。若要筛选接纳了PIJ702或pZHZ8 的链霉菌细胞，所需的硫链丝菌素最小浓度应为______μg/mL (填写表格中给定浓度)；含有重组粒pZHZ8的菌落呈_____色。
[来源:Z+xx+k.Com]
71. 上述目的基因来源于原核生物，其蛋白编码序列（即编码从起始密码子到终止密码子之间的序列）经测定为1265对碱基，试判断对这段序列的测定是否存在错误：_______,并说明依据_______. 19.（2013·新课标全国Ⅰ卷.40）【生物——选修3 现代生物科技专题】阅读如下材料：
材料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵在，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。
材料乙：T4溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。
材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎课在不同个体的体内发育。 回答下列问题：
（1）材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用______法。构建基因表达载体常用的工具酶有______和______。在培育转基因植物是，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是______。 （2）材料乙属于______工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对______进行改造，或制造一种______的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的______序列发生了改变。
（4）材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到______种的、生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为______体，兔乙称为______体。
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20.（2012·福建.32）[生物一现代生物科技专题]必答题(10分)肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
请回答：
(1)进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 。
(2)进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从 细胞中提
取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 (RASmRNA／RAS蛋白质)含最减少引起的。
21.（2012·全国新课程.40）（15分）根据基因工程的有关知识，回答下列问题： （１）限制性内切酶切割ＤＮＡ分子后产生的片段，其末端类型有 和 。 （２）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是 。 （３）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即 DNA连接酶和 DNA连接酶。
（４）反转录作用的模板是 ，产物是 。若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术。
[来源:学科网ZXXK]
（５）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体。
（６）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是 。
22.（2012·山东.35）（8分）【生物——现代生物科技专题】毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
（1）过程①中最常用的运载工具是_______，所需要的酶是限制酶和____________。
（2）在过程②中，用________处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5％CO2的气体环境中，CO2的作用是_________。 （3）在过程③中，用_______处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行________处理。
（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_________。在胚胎移植前，通过_______技术可获得较多胚胎。
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23.（2011·安徽卷）Ⅱ.（9分）家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。
(1)进行转基因操作前，需用___________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。
(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓
2+
冲液（含Mg）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和_________________。 (4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
24.（2011·重庆卷）拟南芥是遗传学研究的模式植物，某突变体可用于验证相关的基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色（TT），某突变体的种皮为黄色（tt）,下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因(Tn)功能的流程示意图。
（1）与拟南芥t基因的mRNA相比，若油菜Tn基因的mRNA中UGA变为ＡＧＡ，其末端序列成为“－ＡＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＡＡＣＵＣＵＡＡ”，则Tn比ｔ多编码 个氨基酸（起始密码子位置相同，ＵＧＡ、ＵＡＡ为终止密码子）。
（２）图中①应为 。若②不能在含抗生素Ｋａｎ的培养基上生长，则原因是 .若③的种皮颜色为 ，则说明油菜Tn基因与拟南芥T基因的功能相同。
（3）假设该油菜Tn基因连接到拟南芥染色体并替换其中一个t基因，则③中进行减数分裂的细胞在联会时的基因为 ；同时，③的叶片卷曲（叶片正常对叶片卷曲为显性，且与种皮性状独立遗传），用它与种皮深褐色、叶片正常的双杂合体拟南芥杂交，其后代中所占比列最小的个体表现为 ；取③的茎尖培养成16颗植珠，其性状通常 （填 不变或改变）。
（4）所得的转基因拟南芥与野生型拟南芥 （填是或者不是） 同一个物种。
25.（2011·天津卷）絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的菌株。其流程图如下。 据图回答：
（1）溶菌酶的作用是_________________________。 （2）PEG的作用是_________________________。
（3）经处理后，在再生培养基上，未融合的A、B难以生长。图中AB融合菌能生长和繁殖的原因是________________________________________________________。
（4）目的菌株的筛选：筛选既能分泌具有絮凝活性的化合物，又能在含有_________________的培养基上生长的AB融合菌，选择效果最好的最为目的菌株。
[来源:学*科*网]
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