植物生理 - 图文

植物生理实验技能训练教程

3．取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 4．用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。

（三）菠菜中叶绿体色素含量测定

1.将上述提取液用乙醇定容至25ml，摇匀。

2．把叶绿体色素提取液倒入比色杯内。以96%乙醇为空白，在波长665nm、649nm和470nm下测定光密度。

3．按公式（10）、（11）、（12）（如用80%丙酮，则按公式7、8、9）分别计算叶绿素a、b和类胡萝卜素的浓度（mg/L），（10）、（11）式相加即得叶绿素总浓度。

4．求得色素的浓度后再按下式计算组织中各色素的含量（用mg/g鲜重或干重表示）：

色素的浓度(C)?提取液体积?稀释倍数叶绿体色素含量= 测定结果记入表2-1。

样品鲜重(或干重)

表2-1 叶绿体色素含量测定记载表

测定日期： 光 密 度 色素浓度(mg/L) 组织中 各色素含量(mg/g) b a+b x.c D665 D649 D470 a 1 2 3 x 1 2 3 x b a+b x.c a a/b 处理 重复

注意事项：

1．为了避免叶绿素的光分解，操作时应在弱光下进行，研磨时间应尽量短些。

2．叶绿体色素提取液不能浑浊。可在710nm或750nm波长下测量光密度，其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时光密度值的5%，否则应重新过滤。

3．用分光光度计法测定叶绿素含量，对分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm，则叶绿素a的测定误差为2%，叶绿素b为19%，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素a和b来校正。

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4．在使用低档型号分光光度计（如：72型、125型、721型等）测定叶绿素a、b含量时，因仪器的狭缝较宽，分光性能差，单色光的纯度低（±5～7nm），与高中档仪器如岛津UV-120、UV-240等测定结果相比，叶绿素a的测定值偏低，叶绿素b值偏高，a/b比值严重偏小。因此，使用时必须用高档分光光度计对低档的分光光度计进行校正。 五、思考题

1．叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素a、b的定量分析？为什么？ 2．为什么提取叶绿素时干材料一定要用80%的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？

实训四 呼吸速率测定技能训练——酸碱滴定法

一、实训目的

1.掌握酸碱滴定法测定呼吸速率的方法。 2.掌握呼吸速率测定原理。 二、实验原理

在密闭容器中加入一定量碱液〔一般用Ba(OH)2〕，并悬挂植物材料，则植物材料呼吸放出的CO2可为容器中Ba(OH)2吸收，然后用草酸滴定剩余的碱，从空白和样品二者消耗草酸溶液之差，可计算出呼吸释放的CO2量。其反应如下： Ba(OH)2 +CO2 →BaCO3↓+ H2O

Ba(OH)2（剩余）+ H2C2O4→BaC2O4↓+ 2H2O 三、材料与仪器试剂

广口瓶测呼吸装置；电子天平；酸式和碱式滴定管；滴定管架。

1/44 mol/L草酸溶液：准确称取重结晶H2C2O422H2O 2.8651g溶于蒸馏水中，定容至1000ml，每ml相当于1mgCO2。

0.05mol/L氢氧化钡溶液：Ba(OH)2 8.6g或Ba(OH)228H2O 15.78g溶于1000ml蒸馏水中。如有浑浊，待溶液澄清后使用。

酚酞指示剂：称取1g酚酞溶于100ml 95%乙醇中贮于滴瓶中。

种子

四、训练内容

（一）碱式滴定管的使用

滴定管的使用包括：洗涤、检漏、涂油、排气泡、读数等步骤。

（1）洗涤 干净的滴定管如无明显油污，可直接用自来水冲洗或用滴定管刷蘸肥皂水或洗涤剂刷洗(但不能用去污粉)，而后再用自来水冲洗，刷洗时应注意勿用刷头露出铁丝的毛

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刷以免划伤内壁。如有明显油污，则需用洗液浸洗。洗涤时向管内倒人10mL左右H2CrO4洗液(碱式滴定管将乳胶管内玻璃珠向上挤压封住管口或将乳胶管换成乳胶滴头)，再将滴定管逐渐向管口倾斜，并不断旋转，使管壁与洗液充分接触，管口对着废液缸，以防洗液撒出。若油污较重，可装满洗液浸泡，浸泡时间的长短视沾污的程度而定。洗毕，洗液应倒回洗液瓶中，洗涤后应用大量自来水淋洗，并不断转动滴定管，至流出的水无色，再用去离子水润洗三遍，洗净后的管内壁应均匀地润上薄薄的一层水而不挂水珠。

（2）检漏 滴定管在使用前必须检查是否漏水。若碱式管漏水可更换乳胶管或玻璃珠；若酸式管漏水，或活塞转动不灵则应重新涂抹凡士林。其方法是，将滴定管平放于实验台上，取下活塞，用吸水纸擦净或拭干活塞及活塞套，在活塞孔两侧周围涂上薄薄一层凡士林，再将活塞平行插入活塞套中，单方向转动活塞，直至活塞转动灵活且外观为均匀透明状态为止（如图所示）。用橡皮圈套在活塞小头一端的凹槽上，固定活塞，以防其滑落打碎。

如遇凡士林堵塞了尖嘴玻璃小孔，可将滴定管装满H2O，用洗耳球鼓气加 压，或将尖嘴浸入热水中，再用洗耳球鼓气，便可以将凡士林排除 。

（3）装液与赶气泡 洗净后的滴定管在装液前，应 先用待装溶液润洗内壁三次，用量依次为10 mL，5 mL， 5 mL左右。

装入操作溶液的滴定管，应检查出口下端是否有气 泡，如有应及时排除。其方法是：取下滴定管倾斜成约 30°角。若为酸式管,可用手迅速打开活塞（反复多次）， 使溶液冲出并带走气泡。若为碱式管，则将橡皮管向上 弯曲，捏起乳胶管使溶液从管口喷出，即可排除气泡 （如图4－8所示）。将排除气泡后的滴定管补加操作溶 液到零刻度以上，然后再调整至零刻度线位置。

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图4－8 碱式滴定管赶出气泡

（1）活塞涂油 （2）活塞安装 （3）转动活塞

活塞涂油，安装和转动的手法

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（4）读数 读数前，滴定管应垂直静置1 min。

读数时，管内壁应无液珠，管出口的尖嘴内应无气泡，尖嘴外应不挂液滴，否则读数不准。读数方法是：取下滴定管用右手大拇指和食指捏住滴定管上部无刻度处，使滴定管保持垂直，并使自己的视线与所读的液面处于同一水平上。不同的滴定管读数方法略有不同。对无色或浅色溶液，有乳白板蓝线衬背的滴定管读数应以两个弯月面相交的最尖部分为准：一般滴定管应读取弯月面最低点所对应的刻度。对深色溶液，则一律按液面两侧最高点相切处读取。 （5）滴定 读取初读数之后，立即将滴定管下端插入锥形瓶(或烧杯)口内约lcm处。再进行滴定。操作酸式滴定管时，左手拇指与食指跨握滴定管的活塞处，与中指一起控制活塞的转动，如图所示。但应注意，不要过于紧张、手心用力，以免将活塞从大头推出造成漏水，而应将三手指略向手心回力，以塞紧活塞。操作碱式滴定管时，用左手的拇指与食指捏住玻璃珠外侧的乳胶管向外捏，形成一条缝隙，溶液即可流出，如图所示。控制缝隙的大小即可控制流速。但要注意不能使玻璃珠上下移动，更不能捏玻璃珠下部的乳胶管以免产生气泡。滴定时，还应双手配合协调。当左手控制流速时，右手拿住锥形瓶颈，单方向旋转溶液，若用烧杯滴定，则右手持玻璃棒作圆周搅拌溶液，注意玻璃棒不要碰到杯壁和杯底，如图所示。

（1）活塞的转动 （2）碱管溶液的流出 （3） 滴定操作

滴定操作示意

（6）滴定速度 滴定时速度的控制一般是：开始时10mL/min左右；接近终点时，每加一滴摇匀一次；最后，每加半滴摇匀一次（加半滴操作，是使溶液悬而不滴，让其沿器壁流入容器，再用少量去离子水冲洗内壁，并摇匀）。仔细观察溶液的颜色变化，直至滴定终点为止。读取终读数，立即记录。注意，在滴定过程中左手不应离开滴定管，以防流速失控。 （7）平行实验 平行滴定时，应该每次都将初刻度调整到“0”刻度或其附近，这样可减少滴定管刻度的系统误差。

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