植物生理 - 图文

植物生理实验技能训练教程

（8）最后整理 滴定完毕，应放出管中剩余的溶液，洗净，装满去离子水，罩上滴定管盖备用。

（二）种子呼吸速率的测定技术 1．装配广口瓶测呼吸装置

取500ml广口瓶1个，加一个三孔橡皮塞。一孔插入一装有碱石灰的干燥管，使吸收空气中的CO2，保证在测定呼吸时进入呼吸瓶的空气中无CO2；一孔插入温度计；另一孔直径约1cm，供滴定用。平时用1小橡皮塞塞紧。在瓶下面装一小钩，以便悬挂用尼龙窗纱制作的小筐，供装植物材料用。 2．空白滴定

拔出滴定孔上的小橡皮塞，用碱滴定管向瓶内准确加入0.05mol/L Ba(OH)2溶液20ml，再把滴定孔塞紧。充分摇动广口瓶几min。待瓶内CO2全部被吸收后，拔出小橡皮塞加入酚酞三滴，把酸滴定管插入孔中，用1/44 mol/L草酸进行空白滴定，至红色刚刚消失为止，记下草酸溶液用量（ml），即为空白滴定值。 3．材料滴定值的测定

倒出废液，先用自来水，再用新煮沸（为驱赶水中CO2）并冷却的蒸馏水洗净广口瓶，重加20ml Ba(OH)2溶液于瓶内，取待测小麦种子100粒，同时称出重量，装入小筐中，打开橡皮塞，迅速挂于橡皮塞的小钩上，塞好塞子（加样操作时，应设法防止室内空气和口中呼出的气体进入瓶内），开始记录时间。经30min，其间轻轻摇动数次，使溶液表面的BaCO3薄膜破碎，有利于CO2的充分吸收。到预定时间后，轻轻打开瓶塞，迅速取出小筐，立即重新塞紧。充分摇动2min，使瓶中CO2完全被吸收，拔出小橡皮塞，加入酚酞3滴，用草酸滴定如前。记下草酸用量，即为样品滴定值。

4．取出广口瓶中的小麦种子，于80℃烘箱中烘干并称取干重。 5．计算呼吸速率

呼吸速率（mgCO2/g(FW)/h）＝（A－B）×1/(W×t)

上式中，A：空白滴定用去的草酸量（ml）；

B：样品滴定用去的草酸量（ml）； W：样品鲜重（g）； t：测定时间（h）。

每毫升1／44mol/L 的草酸相当于1mgCO2。

呼吸速率单位一般可采用mgCO22g鲜重2h，式中滴定值以ml计，mgCO2/ml草酸=1。

表4-1 呼吸速率测定记载表

测定日期：

处处理材料量 测定 空白 样品 呼 吸 速 率 ﹣1

﹣1

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理编方式 鲜重 干重 粒数 时间 滴定值 滴定值 mg/(gFW min ml ml h) mg/100mg/(gDW.h) 粒种子h ﹣1﹣1号 吸胀1 种子 萌动2 种子 芽长3 0.5cm种子 注意事项

课中人数多，室内空气中CO2浓度不断升高，是本实验最大的误差来源。若先做样本测定，后做空白滴定，测定结果甚至出现负值。克服的办法可将广口瓶装满水，在室外迎风处将水倒净，换上室外空气（若用自来水，还应用无CO2蒸馏水或煮沸过的冷开水洗涤广口瓶），塞好橡皮塞、带回室内进行加液、滴定等操作。进行样本测定时也可在室外将装有萌发种子的小筐挂入瓶中，并开始记时。操作要注意勿使口中呼出的气体进入瓶中。 五、思考题

1..哪些因子能影响呼吸速率？

2.在呼吸速率测定中哪些步骤容易出现误差？应怎样避免。 3.广口瓶橡皮塞上加一碱石灰管有何作用？

实训五 抗逆性测定技能训练——电导率仪法

一、实训目的

1.掌握利用电导率仪测定呼吸速率的方法。 2.掌握电导率仪测定呼吸速率测定原理。 二、实验原理

植物组织受到逆境伤害时，由于膜的功能受损或结构破坏，而使其透性增大，细胞内各种水溶性物质包括电解质将有不同程度的外渗，将植物组织浸入无离子水中，水的电导将因电解质的外渗而加大，伤害愈重，外渗愈多，电导度的增加也愈大。故可用电导仪测定外液

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的电导度增加值而得知伤害程度。 三、材料与仪器试剂

电导率仪；真空泵（附真空干燥器）一套；恒温水浴；水浴试管架；20ml具塞刻度试管；打孔器；10ml移液管；试管架；电炉；记号笔；去离子水适量；滤纸适量。 四、训练内容 1、电导率仪的使用

（二）植物组织抗逆性鉴定技术 1．容器的洗涤

电导法对水和容器的洁净度要求严格，水的电导值要求为1~2μS（微西门子）；所用容器必须彻底清洗，再用去离子水冲净，倒置于洗净而垫有洁净滤纸的搪瓷盘中备用。为了检查试管是否洁净，可向试管中加入电导值在1～2μS的新制去离子水，用电导仪测定是否仍维持原电导。 2．试验材料的处理

分别在正常生长和逆境胁迫的植株上取同一叶位的功能叶若干片。若没有逆境胁迫的植株，可取正常生长的叶片若干片，分成两份，用纱布擦净表面灰尘。将其中一份放在﹣20℃左右的温度下冷冻20min（或置40℃左右的恒温箱中处理30min）进行逆境胁迫处理。另一份裹入潮湿的纱布中放置在室温下作对照。 3．测定

（1）将处理组叶片与对照组叶片用去离子水冲洗两次，再用洁净滤纸吸净表面水分。用6～8mm的打孔器避开主脉打取叶圆片（或切割成大小一致的叶块），每组叶片打取叶圆片30片，分装在三支洁净的刻度试管中，每管放10片。

（2）在装有叶片的各管中加入10ml的去离子水，并将大于试管口径的塑料纱网放入试管距离液面1cm处，以防止叶圆片在抽气时翻出试管。然后将试管放入真空干燥箱中用真空泵抽气20min（也可直接将叶圆片放入注射器内，吸取10ml的去离子水，堵住注射器口进行抽气）以抽出细胞间隙的空气，当缓缓放入空气时，水即渗入细胞间隙，叶片变成透明状，沉入水下。

（3）将以上试管置室温下保持1h，其间要多次摇动试管，或者将试管放在振荡器上振荡1h。 （4）1h后将各试管充分摇匀，用电导仪测其初电导值（S1）。

（5）测毕，将各试管盖塞封口，置沸水浴中10min，以杀死植物组织。取出试管后用自来水冷却至室温，并在室温下平衡10min，摇匀，测其终电导值（S2）。 4．计算

按下式计算相对电导度：

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S1相对电导度（L）=S2

相对电导度的大小表示细胞膜受伤害的程度。

由于室温对照也有少量电解质外渗，故可按下式计算由于低温或高温胁迫而产生的外渗，称为伤害度（或伤害性外渗）。

Lt?LCK?1001?LCK 伤害度（%）=

式中 Lt—处理叶片的相对电导度；

Lck—对照叶片的相对电导度。

在电导度测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但需要设一空白试管（蒸馏水作空白），测定样品时同时测定空白电导值，按下式计算相对电导度：

S1?空白电导度相对电导度（L）=S2?空白电导度注意事项

1．CO2在水中的溶解度较高，测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管，以免影响结果的准确性。

2．温度对溶液的电导影响很大，故S1和S2必须在相同温度下测定。 五、思考题

1.测定电解质外渗量时，为何要对材料进行真空渗入？ 2.测定过程中为何进行振荡？

实训六 脯氨酸含量的测定技术技能训练——分光光度法

一、实训目的

1.掌握751分光光度计的使用方法。 2.掌握测定游离脯氨酸含量的原理和方法。 二、实验原理

采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减小了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。 三、材料与仪器试剂

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