PPAR-β对小鼠脓毒症肝损伤的研究

PPAR-β对小鼠脓毒症肝损伤的研究

张馨予 李娜娜 赵鸣雁 康 凯

【摘 要】摘 要 目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体β亚型(PPAR-β)对小鼠脓毒症肝损伤的作用。方法 将120只小鼠随机分为假手数组(SHAM)、脓毒症肝损伤组(LPS)、肝损伤+激动剂组(LPS+GW0742)、肝损伤+抑制剂组(LPS+GSK0660)，每组各30只。在不同时间段检测 ALT、TBIL、AST、IL-1β、IL-18、TNF-α、capase-1、NF-κB水平。结果 不同时间点，LPS+GW0742组血清中ALT、AST和TBIL水平均显著降低于LPS组,差异有统计学意义(P=0.000)；LPS+GW0742组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-18水平均显著低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)；LPS+GW0742组条带面积较LPS组减少，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PPAR-β可以通过下调NF-κB分子的表达及炎性因子的产生，从而减轻小鼠脓毒症肝损伤，为脓毒症的治疗提供新的靶点。

【期刊名称】《医学研究杂志》 【年(卷),期】2019(048)010 【总页数】6

【关键词】关键词 脓毒症 脓毒症小鼠肝损伤 PPAR-β GW0742 GSK0660 基金项目：黑龙江省博士后基金资助项目(LBH-Z16147);黑龙江省教育厅基金资助项目(12521214)；黑龙江省卫生厅基金资助项目(2012-569);黑龙江省哈尔滨市科技局人才基金资助项目(2017RAQXJ177)

脓毒症(sepsis)是由感染导致的一类机体炎性反应，反映了感染后的全身炎性综合征[1]。脓毒症是导致重症监护病房患者死亡的主要原因之一，全球每年约有

1800万病例，随着重症监护病房救治技术的进步，患者病死率虽然已显著下降，但仍高达20%～48%[2]。导致患者死亡的原因是多器官衰竭。肝脏可以清除细菌并对炎性介质产生防御反应，是脓毒症最易损伤的器官之一。早期研究认为，在脓毒症导致的肝功能障碍中，黄疸和高胆红素血症为疾病的晚期表现，目前研究认为，肝功能的损伤常发生在早期[3]。脓毒症肝损伤根据发病机制分为原发性和继发性两类，原发性肝损伤主要是由于缺血及再灌注致肝细胞缺血缺氧性损伤为主，继发性肝损伤主要由于炎性因子及感染内毒素导致的炎性损伤为主[4]。目前研究认为，脓毒症相关的肝功能障碍主要是由全身或微循环障碍、细菌和内毒素(脂多糖)移位以及随后炎性细胞因子和介质的激活引起的[5～7]。然而，脓毒症合并肝损伤的发病机制较为复杂，各因素之间可以相互影响相互作用，目前对这一疾病的病理生理机制仍处于研究探索中。

近年来，过氧化物酶增殖物激活受体(peroxisome proliferater-activated receptor，PPAR) 在炎性反应中的作用逐渐被人们重视[8，9]。PPAR包括 PPAR-α、PPAR-β和 PPAR-γ 3种亚型[10]。当前研究表明，PPARs 在细胞能量代谢、增殖凋亡、脂质稳态、炎性反应调节等方面发挥重要作用，目前研究较多的是 PPAR-α和PPAR-γ[11～13]。既往文献表明，PPAR-γ能够减轻脓毒症大鼠肝损伤[14]。同时，有研究者发现应用PPAR-β内源性激动剂能明显增加 PPAR-β表达，可以通过抑制环氧酶(cyclooxygenase，COX)活性，减少氧自由基的释放，从而减少肝脏的脂质过氧化，减轻肝脏氧化应激损伤[15]。有相关文献报道PPAR-β是NF-κB 上游效应分子，能够通过抑制 NF-κB 的活化，从而减低 LPS介导的TNF-α和 IL-1β介导的PGE2 的表达。由此认为，PPAR-β具有抑制炎性反应及抗凋亡作用[16]。目前，关于 PPAR-β在脓毒症

中的相关研究报道极为有限，尚无深入的机制研究。

本实验采用LPS制备最符合临床脓毒症患者病理生理过程的脓毒症动物模型，观察脓毒症对肝的影响，并通过腹腔注射选择性激动剂GW0742 和抑制剂GSK0660进行干预，观察PPAR-β能否在脓毒症小鼠的肝组织发挥保护作用，探讨PPAR-β在脓毒症肝损伤中能否抑制环氧酶(cyclooxygenase，COX)活性，减少线粒体氧自由基的释放，从而起到抗炎、抗氧化和抗凋亡的保护作用，有望为脓毒症肝损伤的防治提供新的治疗靶点，提供新的靶向治疗药物。

材料与方法

1.材料：(1)实验动物：SPF 级雄性 C57/BL 小鼠 8～10 周龄，由哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心提供，用于实验的小鼠体质量约为20～30g。(2)主要仪器和试剂：0412-1型台式离心机购自上海手术器械厂，全自动生化分析仪购自德国西门子公司，PPAR-β激动剂GW0742 和抑制剂GSK0660购自美国Sigma 公司，小鼠源单克隆抗体IL-1β、IL-18、TNF-α、capase-1、NF-κB购自英国 Abcam 公司，小鼠 IL-1β、IL-18、TNF-α的酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)试剂盒、β-actin 小鼠源单克隆抗体、羊抗小鼠免疫球蛋白G辣根过氧化物酶(immunoglobulin-horseradish peroxidase，IgGHRP)，二抗均购自武汉伊莱瑞特生物工程有限公司。

2.方法：(1)实验动物分组：120只SPF级雄性小鼠随机分为假手数组(SHAM)、脓毒症肝损伤组(LPS)、肝损伤+激动剂组(LPS+GW0742)、肝损伤+抑制剂组(LPS+GSK0660)，每组均为30只。每组小鼠于造模后再按6、12、24h 3个时间分为3个亚组,每组各10只。(2)脓毒症小鼠肝损伤模型建立：SPF级小鼠