分子生物综合实验论文模板

湖北师范学院2011届生命科学学院本科毕业论文

烟草组织培养的研究

李娟（指导老师：王友如）

（湖北师范学院生命科学学院 湖北 黄石 435002）

引言

目前，生物技术正在世界突飞猛进地发展，尤其在医学，农业，食品工业，能源工业，环境保护各个领域显示出极大的生产潜力，组织培养是最基础的生物技术，它的全面应用已使农业的生产走向集约化和工业化[1]。

植物组织培养也就是所谓的植物克隆，简单的说就是提取植物的根茎叶芽或一个细胞，通过生物技术手段，在很短的时间内诱导分化出与母体完全相同的植物。植物的组织培养是一种无性繁殖，具有用材经济，生产周期短，繁殖系统大，培育无病毒苗，可获得新的突变体，降低成本提高工作效率的特点，还能保持亲本的优良性状，它是植物基因工程的重要组成部分，是植物基因工程研究的一项重要技术手段[2]。

烟草作为植物组织培养的常用植物，可以利用烟草的组织培养为其它的研究提供条件。

（参考文献编号以上标形式按顺序插入）

1 材料与方法 1.1 材料

1.1.1 实验材料

烟草种子

1.1.2 仪器设备

一、 常用仪器

1. 蒸馏水器

2. 手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅

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分析天平 （AB204-N型，梅特勒-托利多仪器上海有限公司） 超净工作台

电热干燥箱烘箱 （WMK-02型，武汉电控仪器厂） 恒温光照培养箱 电冰箱

显微镜和解剖镜 ① 手提式解剖镜 ② 立体解剖镜 ③ 普通显微镜 9. 旋转培养机 10. 离心机

11. 酸度测定仪：⑴ 精密PH4－7试纸；⑵ 笔型袖珍酸度计。 二、 必要的器皿 （一）玻璃器皿 1. 培养器皿

① 试管

② 三角烧瓶（锥形瓶）

③ 圆形高形培养瓶（罐头瓶） ④ 培养皿

⑤ 扁身培养瓶 ⑥ L型和T型管 ⑦ 凹面载玻片

2. 盛装器皿

①试剂瓶 ②烧杯 3. 计量器皿

①量筒 ②容量瓶 ③吸管 4. 其它器皿

滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。 （二）金属器械 1. 镊子类

① 20－25cm长型镊子（接种或转移愈伤组织） ② 尖端弯曲“枪型”镊子（镊取较小的植物组织） ③ 尖头钟表镊子和鸭嘴镊子（剥离表皮用）

④ 尖端为小铲状镊子（挖取带琼脂培养基的培养物） 2. 解剖刀和刀类

① 眼科用刀种牛痘疫苗的菱形刀（切割柔软组织中小细胞团） ② 解剖刀（手术刀）

③ 双面刀片焊接在玻棒上（切取茎尖用）

2

3. 4. 5. 6. 7. 8.

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④ 锋利小刀、大刀和小铁锹 3. 剪刀类

①解剖剪 ②眉剪 ③眼科剪 ④18－25cm弯头剪 ⑤俢枝剪 4.接种针 1.1.3 试剂及溶液

一、试剂

（一） 用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。 （二） 消毒剂

1. 20%次氯酸钠溶液:称取20g次氯酸钠用少许水溶解,100ml水定容。

2. 0.1%升汞（HgCl2）溶液:称取0.1g HgCl2少许水溶解，100ml水定容。

（三） 洗涤剂

1. 2HCl酒精:95%酒精100ml加入2mlHCl 2. 硫酸－重铬酸钾洗液

称取10g重铬酸钾加入蒸馏水90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml，放入棕色玻璃瓶备用，（注意：切记不可将盛过洒精，甲醛等还原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重铬酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，失去洗涤作用）。这些器皿必须用自来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。

（四） 1摩尔浓度(mg/L )NaOH 和1摩尔浓度（mg/L）HCl

二、培养基

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1. MS培养基母液配制（单位：毫克 mg） 母液 编种号 类 I 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 II 微量元素 CaCl2·2H2O MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O H3BO3 KI Na2MoO4·7H2O CuSO4.5H2O4 CoCL2.6H2O 铁盐 III 有机物 Na2-EDTA FeSO4.4H2O 甘氨酸 盐酸吡哆醇 盐酸硫铵素 烟酸 肌酸

2. 分化培养基（BA培养基）

MS0+6-BA(1mg/ml)+NAA(0.1mg/ml)+3%蔗糖+0.6%琼脂(PH5.8~6.0)

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成 分 规定量 浓缩 倍数 称取量 母液 体积 配制1升培养基吸取量定容 100 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 37.3 27.8 2.0 0.5 0.1 0.5 100 10 10 10 10 10 100 100 100 100 100 100 100 100 100 50 50 50 50 50 19000 16500 3700 1700 4400 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 3730 2780 100 25 5 25 5000 1000 100 10 1000 10 500 10