激光共聚焦显微镜操作手册最终版 - 图文

依据荧光染料在样品中位置的不同进行拆分。

首先确定需要拆分的荧光染料在样品图像的位置，使用ROI绘图工具选定荧光染料区域。

在主界面菜单的[Image]工具栏中打开[Spectral Unmixing Setting]视窗。

在[Spectral Unmixing Setting]视窗的[category]中选择[ROIs]选项，点击[Add]，将蓝色条选定的ROI区域添加到[Element]，在[Element]中可改变每个ROI区域的表示颜色。下方的光谱图为三个ROIs的光谱分布图。

41

点击[Umix]按钮，即可获得经拆分后的图像。

如果背景荧光也需要分离，可将背景选定为选定背景ROI，然后进行同样的操作即可。

42

10、Living拆分

与ROI拆分同样依据荧光染料在样品中位置的不同进行拆分，区别在于可在Live状态下实时观察拆分后的扫描图像，并及时对荧光亮度进行调整。 首先使用ROI绘图工具选定荧光染料区域。

在主界面菜单的[Image]工具栏中打开[Spectral Unmixing Setting]视窗。

在[Spectral Unmixing Setting]视窗的[category]中选择[ROIs]选项，点击[Add]，将蓝色 条选定的ROI区域添加到[Element]，在[Element]中可改变每个ROI区域的表示颜色。下

43

方的光谱图为三个ROIs的光谱分布图。

点击[close]，在主界面快捷方式栏点击[Live Unmixing]按钮。

或者在主界面[Image]菜单中选择[Live Unmixing]选项也可实现同样操作

44

点击[Live]按钮，得到扫描中的荧光拆分图像，可实时调节荧光亮度等。

再次点击[Live Unmixing]按钮或者在主界面[Image]菜单中再次选择[Live Unmixing]选项可恢复为普通Live图像（即32通道图像）。 11、盲拆分（Blind Unmixing）

利用程序自动识别并拆分不同荧光标记所发出的重叠光谱，得到拆分厚的图像。 在主界面[Image]菜单中选择打开[Blind Unmixing]视窗。设置盲拆分参数。

45