无菌检测风险控制

无菌检测培养基因素

应该考虑的可能影响实验结果的因素还包括培养基和冲洗液。可以使用干粉培养基自行配制也可以使用成品培养基和冲洗液。这两者的正确使用与否直接影响到实验的结果。通常会做促生长试验和无菌试验来确认培养基、冲洗液的有效性和无菌性。进行无菌实验室通常还会使用到一些添加剂，尤其是对于抑菌性比较强的样品，会添加一些酶在培养基或者冲洗液中来抑制残留的抗生素。所以，这些添加物也是需要保证有效性和无菌性的，当添加物加入到培养基和冲洗液中时，必须重新对培养基和冲洗液的有效性和无菌性重新进行测试。无菌性，促生长试验结果，pH值和外观通常是需要进行测试的项目。

培养基种类包括中国药典（2010版）中的改良马丁培养基和硫乙醇酸盐培养基FTM，以及EP/USP/中国药典（2015版）中的胰酪大豆胨液体培养基TSB（用于真菌和需气菌的培养）和硫乙醇酸盐培养基FTM（厌氧菌和需气菌培养）。

对于FTM培养基，分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5。

培养基适用性实验的无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。

灵敏度检查：

取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天。

取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种小于100CFU的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。

空白对照不生长，接种菌液的培养基，应有明显生长。

缓冲液的作用包括溶解、稀释、润湿滤膜、冲洗。缓冲液无菌性检测的目的是确保冲洗液的无菌性；无菌检查中避免由于实验材料造成假阳性风险。

薄膜过滤方法：过滤之后培养观察14天，没有微生物生长（肉眼判断培养基没有浑浊），冲洗液被认为是无菌的；产品无菌检查同步进行阴性对照。