实验一 高效液相色谱法测定水样中两种塑化剂的含量

实验一 高效液相色谱法测定水样中两种塑化剂的含量

一、实验目的

(1) 了解外标法的定量原理，掌握外标法校正曲线的制作。 (2) 学会用外标法对未知样品进行定量分析的实验技术。 (3) 进一步熟悉高效液相色谱仪的结构、组成、应用及操作。 二、实验原理

外标法又称校正曲线法。色谱分析中，在相同的操作条件下，用已知纯样品配成不同浓度的标准溶液进行试验，测量各种浓度下对应的峰高或峰面积，用峰高或峰面积对浓度作出标准曲线。样品分析时，进入同样体积的分析样品，从色谱图上求出待测组分的峰高或峰面积，根据标准曲线查出样品中待测组分的含量。外标工作曲线如下：

外标法工作曲线示意图

在一些工厂的常规分析中，样品中各组分的浓度一般变化不大，在这种情况下可不必作校正曲线，而用单点校正法来进行分析。即配制一个和被测组分含量十分接近的标准样，定量进样，由被测组分与外标组分峰面积或峰高比求被测组分的百分含量。计算公式如下：

Xi%?Ei?式中 Xi——试样中组分i的含量；

Ai?100% AEEi——标准样中组分i的含量； Ai——试样中组分i的峰面积；

AE——标准样中组分i的峰面积。

外标法的优点是操作简单和计算方便，缺点是色谱操作条件对分析结果的影响很大，不像归一法和内标法定量操作中可以互相抵消。在实际应用中，应严格控制操作条件稳定，并经常对Ei/AE 值和工作曲线进行校正，以减小分析误差。 三、仪器与试剂

1．仪器

高效液相色谱仪(带紫外检测器)；色谱住：C18(4.6×150 mm)；超声波清洗器；微量进样器(100μL)；溶剂过滤器。

2．试剂

甲醇(色谱纯)；邻苯二甲酸二甲酯(AR)；邻苯二甲酸二乙酯(AR)。 四、实验内容

(1) 流动相的准备：将已过滤和脱气的色谱甲醇倒入溶剂贮瓶中备用。 (2) 按先后顺序正确打开电脑和仪器的电源开关。

(3) 待仪器自检结束后，双击电脑桌面上的仪器控制面板，进入色谱工作站操作界面，打开高压泵上的排液阀，点击Purge按钮，以3~ 5mL·min-1的大流量清洗管路，冲洗完毕后，关闭排液阀。

(4) 设定流动相的流速为1mL·min-1，流动相比例为甲醇 : 水= 80 : 20，检测波长254nm。 (5) 开机约30分钟仪器稳定后，用调零旋钮调节基线位置。 (6) 将配好的不同浓度的标准溶液进样，记录保留时间和峰面积，每个样平行进样三次。

(7) 将待测样品进样，记录保留时间和峰面积，平行进样三次。 (8) 将已知物进样，记录保留时间(定性)。

(9) 所有样品分析完后，让流动相继续流动20分钟，然后停泵，关机。 五、注意事项

(1) 实验室的仪器设备不可能完全一样，操作时一定要参照仪器的操作规程。 (2) 用微量进样器吸液时，要防止气泡吸入。 六、数据处理

(1) 根据实验数据做出标准曲线，求出回归方程和相关系数。 (2) 根据标准曲线求出样品中待测物的含量。 七、问题与讨论

(1) 液相色谱的定量方法有哪几种？各有什么优缺点？

(2) 与经典的柱色谱比较，高效液相色谱法是如何实现高效和快速分离的？ (3) 高效液相色谱常用检测器有哪几种？试述其原理及应用。