A.除去细胞壁形成原生质体，可运用的酶是纤维素酶、淀粉酶和果胶酶 B.通常可诱导上述原生质体相互融合的方法是PEG和灭活的病毒诱导 C.杂种细胞形成的标志是诱导产生了新的细胞壁
D.愈伤组织形成“白菜—甘蓝”植物体必须经过脱分化和再分化两个过程 答案 C
解析 除去细胞壁的酶有纤维素酶和果胶酶；诱导植物原生质体融合不能用灭活的病毒；杂种细胞形成的标志是诱导产生了新的细胞壁；愈伤组织形成“白菜—甘蓝”植物体属于再分化过程。
5.科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄—马铃薯杂种植株，为了便于杂种细胞的筛选和鉴定，科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质，其培育过程如图所示，请据图回答下列问题：
(1)植物体细胞杂交依据的生物学原理有________________________________。
(2)过程①常用的酶是____________________，细胞融合完成的标志是__________________。 (3)植物原生质体融合过程常利用化学试剂____________诱导融合，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，根据细胞膜表面荧光的不同可观察到__________种不同的原生质体(只考虑细胞两两融合的情况)，当观察到______________________________________时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。
(4)过程③和过程④依次为_______________________________________________________， 过程④中的培养基常添加的植物激素是__________________________。
(5)若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞内有n条染色体，则“番茄—马铃薯”细胞在有丝分裂后期含______条染色体。若杂种细胞培育成的“番茄—马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于____________植株。
答案 (1)细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 (2)纤维素酶和果胶酶 再生出新的细胞壁 (3)聚乙二醇(或PEG) 3 融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色荧光 (4)脱分化和再分化 生长素和细胞分裂素 (5)2(m＋n) 单倍体
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解析 (1)植物体细胞杂交包括原生质体融合和培育杂种植株两大步骤，两者的原理分别是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。(2)去除细胞壁常用的酶是纤维素酶和果胶酶，细胞融合完成的标志是再生出新的细胞壁。(3)化学促融剂是聚乙二醇，两两融合的原生质体有三种：番茄—番茄、马铃薯—番茄、马铃薯—马铃薯，其中杂种细胞的细胞表面有两种颜色的荧光。(4)过程③和过程④分别表示脱分化和再分化，诱导细胞分化所用的植物激素主要是生长素和细胞分裂素。(5)“番茄—马铃薯”体细胞有m＋n条染色体，有丝分裂后期染色体数目加倍；由配子发育成的个体均为单倍体。
1.植物组织培养和植物体细胞杂交的比较
名称 原理 植物组织培养 细胞的全能性 植物体细胞杂交 细胞膜具有一定的流动性和细胞的全能性 过程 选材 技术 操作 选取根尖、茎尖、形成层部位最容易诱导脱分化 脱分化、再分化等 不同的植物细胞 除脱分化、再分化外，还要用酶解法去除细胞壁，用一定的方法诱导细胞融合 关系 植物组织培养是植物体细胞杂交的基础，植物体细胞杂交所用的技术更复杂
2.植物体细胞杂交过程中杂种细胞类型及检测方法 (1)诱导产物(假设用于杂交的两种植物细胞分别为A、B)： ①未融合的细胞：A和B。 ②两两融合的细胞：AA、BB和AB。 ③多细胞融合体。
(2)检测方法：对诱导产物中的细胞进行植物组织培养，然后根据得到的植物性状进行判断。 ①若只表现出一种植物的性状，说明是未融合细胞。 ②若得到的是具有两种亲本性状的植物，说明是杂种植株。
③若得到的是具有两种亲本性状的植物，且一种植物的性状得到加强，则是多细胞融合体。 ④若只表现出一种植物的性状且效果得到加强，则是同种细胞融合的结果。
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考点二 动物细胞培养与体细胞克隆
1.动物细胞培养 (1)动物细胞的培养过程
(2)培养条件
①无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，添加抗生素，定期更换培养液以清除代谢产物。
②营养：除正常的有机和无机营养外，需加入血清、血浆等一些天然成分。 ③适宜的温度和pH：温度为36.5±0.5_℃(哺乳动物)，pH为7.2～7.4。
④气体环境：含95%空气加5%CO2的混合气体，其中后者的作用是维持培养液的pH。 (3)应用：生物制品的生产、检测有毒物质、医学研究。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 (1)动物体细胞核移植技术的过程
(2)原理：动物体细胞核具有全能性。 (3)结果：产生新个体。
(4)应用：①加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育；②保护濒危物种；③生产医用蛋
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白；④作为异种移植的供体；⑤用于组织器官的移植。 [诊断与思考] 1.判断下列说法的正误
(1)连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型( × )
(2)制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理( × ) (3)肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸( × )
(4)与“多利”羊等克隆哺乳动物相关的技术有胚胎移植、细胞培养和核移植( √ ) (5)植物原生质体融合和动物细胞融合原理是相同的( √ ) (6)动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶的作用相同( × ) 2.请思考下列与动物细胞培养及体细胞核移植相关的问题。
(1)动物细胞培养过程中，也需要将动物细胞分散开来，这与观察植物细胞的有丝分裂中的解离作用类似。两种处理方法的结果最大的区别是什么？
提示 动物细胞培养过程中的处理，动物细胞还保持活性；但在植物细胞的解离过程中，细胞被解离液杀死，已经失去活性。
(2)通过动物体细胞核移植技术获得的克隆动物，其遗传物质是否和供核细胞的遗传物质完全一样？
提示 不完全一样。细胞核遗传物质一样，但细胞质遗传物质和提供去核卵母细胞的个体几乎完全一样(分析遗传物质来源时，一定要注意细胞核遗传物质和细胞质遗传物质的区别)。
题组 动物细胞培养与动物体细胞核移植的过程分析
1.某研究小组为测定某种药物对体外培养细胞的毒性，准备对某种动物的肝肿瘤细胞(甲)和正常肝细胞(乙)进行动物细胞培养。下列叙述正确的是( ) A.制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶处理肝组织块 B.恒温培养箱中的CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸 C.为了保证细胞培养所需的无毒环境，需大量添加各种抗生素 D.本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙细胞的毒性大小 答案 D
解析 在利用肝组织块制备肝细胞悬液时，常用胰蛋白酶，不能使用胃蛋白酶，因为胃蛋白酶需要在强酸环境下才能起作用，但这样的环境不适于细胞生存，A错误；细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是维持培养液的pH，B错误；抗生素是用来杀菌的，不是杀病毒的，C错误；本实验应设置对照实验，用添加药物的培养液分别培养甲、乙细胞，根据变异细胞占培养细胞的比例，以检测药物对甲、乙的毒性大小，D正确。
2.如图所示为哺乳动物生殖的过程。其中b为卵细胞，c为体细胞。下列叙述不正确的是
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