12、简述超净工作台的工作原理和使用方法原理是以过滤装置净化空气，在操作者和操作台之间形成无菌风幕，保证台面及其上空呈无菌空间,同时紫外光灯可以杀灭台面上的微生物防止交叉污染。 13、怎样管理培养室？（1）消毒杀菌（2）温度和湿度控制（3）光照控制（4）污染材料的处理 14、怎样对初代培养进行观察的记录？
15、现要研究活性炭对芽分化的影响，怎样进行实验设计？ 16、简述采用紫外线灭菌的原理和方法。P25 17、简述过滤灭菌的原理和方法。P27
第四章 培养方法 一、名词解释 1.分批培养
2.连续培养是在培养过程中不断加入培养基，使培养液中的营养物质能够连续得到补充的培养方法 3.半连续培养是介于成批培养和连续培养之间的一种培养方法。是在完成成批培养一个周期后，只从反应器中取出大部分的细胞悬浮液，保留小部分细胞悬浮液作为下一次培养的种子细胞，然后加入新鲜培养基进行培养的方法。
4、固体培养在培养基中加入一定量的凝固剂（如琼脂、明胶等）形成固体培养基，将植物的植物器官、组织、细胞或原生质体接种于培养基上（中）的组织培养方法。 5、静止液体培养是指在培养基中不加入凝固剂，而直接将培养物接种到液体中或其他支持物上进行培养的方法。
6、悬浮培养是指将离体的细胞或小细胞团悬浮在液体培养基中进行培养的方法。
7、光自养培养是指培养容器中的植物在人工光照条件下，吸收CO2进行光合作用，通过完全自养的方法进行生长和繁殖的方法。 二、判断题
1、培养方法是影响植物组织培养效率的重要因素。（√ ） 2、固体培养是组织培养中最常用的方法。（√ ） 3、静止液体培养易使培养物玻璃化。（√ ） 4、悬浮培养只能用于细胞培养。（ x ） 5、光自养培养因不需糖，因而减少了污染。（√ ） 三、问答题
1、比较分析固体培养和悬浮培养的优缺点。●适合于各种外植体和组织培养 的各个阶段●有利于气体交换●防止或减少玻璃化●不利于代谢物的扩散
●可用于组织培养的诱导、繁殖和分化阶段●增加培养物与液体接触面，促进营养吸收●利于代谢物的扩散●有利于气体交换●需要一定的设备 2、研究培养方法有何重要意义？培养方法是影响植物组织培养效率的重要因素 培养方法研究推动植物细胞工程研究的进步
3、静止液体培养的特点是什么？●可用于组织培养的各个阶段●减少成本（浅层液体培养）●利于代谢物的扩散,减小自体抑制效应●扩大营养接触面●不利于气体交换●易诱导玻璃化 4、悬浮培养有什么作用？能够提供大量均一的悬浮细胞 5、试比较成批培养和联系培养的特点。
6、光自养培养的特点是什么？是植物组织培养的一种创新，也是环境控制技术和生物技术的结合。它采用环境控制的手段，用二氧化碳代替糖来作为植物体的碳源，通过人工控制，提供适宜植株生长的光、温、水、气、营养等条件，以促进植株的光合作用。其适用范围涵盖所有植物的微繁殖。 第五章 薄层培养和单细胞培养 一、名词解释
1、薄层细胞培养：从外植体的表皮撕下数层细胞于合适的培养基上进行的离体培养；现也将外植体横切成1mm厚的薄片
2、单细胞培养:指从植物器官，愈伤组织或细胞悬浮培养液中游离出单个细胞，于无菌条件下，进行体外培养，使其繁殖，生长，发育的一门技术。
3、平板培养法 ：将悬浮培养的细胞接种到一薄层固体培养基中进行培养的技术。 4、最低有效密度：在植物悬浮培养液中，使悬浮培养细胞能够增殖的最少接种量。 5、看护培养法：指用一块愈伤组织或植物离体组织看护单细胞使其生长并增殖的一种单细胞培养方法。
6、植板率：长出的细胞团的单细胞在接种细胞中所占的百分比数。 二、判断题
1、细胞培养周期是指一定起始密度的单细胞，从开始培养到细胞数目和总重量停止增长的过程。（ √ ）
2、薄层细胞培养是从外植体的表皮撕下数层细胞于合适的培养基上进行的离体培养。（ √ ） 3、能被酚臧红花染成红色的细胞为活细胞。（ × ）-----死细胞 4、细胞密度是影响细胞培养的重要因素。（√ ） 5、Gelrite是悬浮剂，而Ficoll是凝固剂。（×） 三、问答题
1、为什么要进行单细胞培养？
1.建立单细胞无性系（cell line）2.排除体细胞干扰3.观察单细胞如何进行分裂、分化、生长及发育，为大规模培养作准备
2、薄层培养有什么特点？
1.薄层培养细胞组织结构简单 2.对调控因子敏感 3.培养容易成功 3、怎样进行薄层培养？
外植体 → 外植体消毒 → 切取或分离材料 → 接入培养基中培养 → 结果观察 4、制备单细胞的方法有哪些？机械分离法 酶解法 愈伤组织诱导法 1.从培养愈伤组织中游离单细胞，通过反复继代使愈伤增殖并提高其松散性； 2.机械研磨法； 3.果胶酶分离法
5、简述从愈伤组织中游离单细胞的步骤
600～800mg生长旺盛的愈伤组织→250mL含30～40mL培养基的三角瓶中→90～130r/min连续振荡培养2～3周→用100～130目网过滤除去大的细胞团→滤液离心收集游离细胞，弃上清液→加入适当体积的培养基使细胞悬浮 6、怎样进行平板培养？
（1.）单细胞悬浮液的制备（2）调节细胞密度（3）培养基和凝固剂选择，浇平板 （4）接种培养 做好标记
7、简述影响单细胞培养的因素。
1.条件培养基的作用；2.细胞密度；3.生长激素；4.挥发性物质的影响；5.适当的PH值，提高培养基中铁的含量等
第六章 植物原生质体培养 一、名词解释
1、植物原生质体：原生质体（protoplast）是指除去细胞壁的裸细胞 2、植物原生质体培养：原生质体培养是指将原生质体放在人工配制的培养基上和人工控制的条件下培养成再生植株的过程。 3、亚原生质体：
不完整的原生质体经物理化学处理得到的小原生质体。 4、微小原生质体
亚原中具薄层细胞质和完整细胞核的部分 5、微核原生质体
亚原中具薄层细胞质和部分细胞核的部分
6、胞质体： 即无细胞核，只有细胞质的原生质体 二、判断题
1、原生质体起始材料的特性和生理状态是决定原生质体质量的重要因素之一。（ √） 2、用沉降法纯化原生质体常引起原生质体破碎，这是因为高渗溶液的作用。（ × ） 3、对分离原生质体的材料进行低温预处理的目的是为了提高原生质体的产量。（√ ） 4、植物原生质体是观察大分子吸收和转移的良好材料。（ √） 5、机械法适合于从分生组织细胞中分离原生质体。（×） 6、分离原生质体的酶液中加入氯化钙是为了稳定原生质膜。（ √） 7、在原生质体分离和培养中，蔗糖是一种广泛使用的渗透压调节剂。（ √） 8、酶解处理一般在光照条件下进行。（ ×）
9、分离原生质体的原始细胞状态影响其脱分化的进行。（√ ） 10、一般认为原生质体出芽与培养基成分有密切关系。（√ ） 三、问答题
1．何谓原生质体，原生质体作为遗传饰变和生理生化研究的材料有何特点？ 原生质体（protoplast）是指除去细胞壁的裸细胞 是体细胞杂交育种的材料 是转基因的良好受体
是开展基础理论研究的良好材料 是分离细胞器的良好材料
2．简述酶法分离植物原生质体的基本原理。
植物细胞壁由纤维素，半纤维素，果胶质等组成，通过用酶把原生质体外的细胞壁分解，便能得到完整的原生质体。
3．简述两步法分离植物原生质体的程序。
先用果胶酶离析植物组织，使植物组织从组织细胞中分离出来，然后手机细胞经洗涤后用纤维素酶解离细胞壁，最后获得原生质体。
4．如何纯化原生质体并鉴定其活力?P272
5．与其它组织、细胞培养相比，原生质体培养有何特点? 是体细胞杂交育种的材料 是转基因的良好受体
是开展基础理论研究的良好材料 是分离细胞器的良好材料
6．简述X平板法培养植物原生质体的原理和方法。
为了减少一部恩细胞和组织所产生的有害物质对其他存活细胞的影响，将一定量的活性炭加到培养基，以改善细胞或组织的生长与细胞群落的形成。
将固体平板分成四块，在2和4中加入储备培养基（含1%活性炭），1和3不加活性炭培养原生质体。
7．简述几种原生质体培养方法的特点。
固体：培养基用琼脂固化，灭菌后在45度植入原生质体。生长速度慢，容易观察培养效果和生长情况。
液体利用液体培养基培养，通气性好，排泄物容易扩散，易于补加培养基，易于转移，一旦有污染就导致实验失败。 混合两相：兼顾以上。
8．简述影响植物原生质体培养的因素。
植物种类，原生质体活力，原生质体起始密度，渗透调节，原生质体粘连，培养条件和方法。 9．简述渗透剂在植物原生质游离中的作用。
使酶能较快地发挥作用而原生质体有维持在一定渗透压下，使之不涨破不收缩。 10.生质体培养的应用。
体细胞杂交，遗传转化以及细胞器转移，无性系变异的良好体系，分离植物细胞器的理想材料，基础研究的实验系统。
第七章 植物胚胎培养 一、名词解释
1、离体胚培养：胚培养就是采用人工的方法将胚从种子中分离出来，在人工培养的条件下，使其他发育成正常植株。 2、成熟胚培养 3、幼胚培养
4、早熟萌发：幼胚接种后，离体胚不继续进行胚性生长，而是在培养基上迅速发成幼苗 5、植物胚乳组织培养
6、胚性发育：幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株 二、判断题
1、胚培养可用于克服杂种不活性。（√ ） 2、早熟萌发的胚一般能形成许多植株。（√） 3、幼胚培养的初期需在黑暗条件下进行。（√ ） 4、胚乳培养的再生植株都是三倍体。（ X ）
5、游离胚乳核时期和成熟胚乳时期是胚乳培养的最佳时期。（√ ） 三、问答题
何谓胚培养？简述胚培养的意义。
胚培养就是采用人工的方法将胚从种子中分离出来，在人工培养的条件下，使其他发育成正常植株。 离体幼胚培养胚发育有几种类型？各有何特点？
1)、胚性发育：幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。
(2)、早熟萌发：幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发。在大多数情况下，一个幼胚萌发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体，从而可以形成许多植株，这种现象就是所谓的丛生胚现象。
(3)、愈伤组织： 在许多情况下，幼胚在离体培养中首先发生细胞增殖，形成愈伤组织。一般来讲由胚形成的愈伤组织大多为胚
影响离体幼胚培养的主要因素有哪些？ 1. 基因型
2、胚龄和放置方式 3、培养基：
蔗糖：球形胚8-12%，鱼雷形胚4-6%
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