（1）研究人员利用体细胞核移植技术成功克隆了“中中”，该过程体现的原理是_____。 （2）为了获得较多的卵母细胞需要对供体注射__________，收集并选取处在_____时期的卵母细胞用于核移植。
（3）采集猕猴胚胎组织块，用__________处理获得分散的成纤维细胞，放置于37℃的CO2培养箱中培养，其中CO2的作用是___________。
（4）核移植后，克隆猴“中中”的诞生还需利用_____、_____现代生物工程技术。 （5）在现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的未受精的卵细胞中才能发育成新个体，你认为最可能的原因是____。 A.卵细胞大，便于操作 B.卵细胞含有的营养物质多
C.卵细胞的细胞质可使体细胞核全能性得到表达 D.重组细胞才具有全能性
【答案】 (1). 动物体细胞核的全能性 (2). 促性腺激素 (3). 减数第二次分裂中期（或MⅡ中期） (4). 胰蛋白酶 (5). 维持培养液的pH (6). 早期胚胎培养 (7). 胚胎移植 (8). C 【解析】 【分析】
由图可知，克隆猴“中中”的培育过程是：借助动物细胞核移植技术，将胎儿成纤维细胞的细胞核与去核的卵母细胞重组形成重组细胞，激活重组细胞，使其完成分裂和发育进程，形成胚胎；再借助胚胎移植技术将克隆胚胎移植到受体动物的子宫里继续发育，进而得到克隆猴“中中”。动物细胞核移植技术的基础是动物细胞培养技术。 【详解】(1)体细胞核移植技术的原理是动物体细胞核的全能性。
(2) 对供体注射促性腺激素，使其超数排卵，可以获得较多的卵母细胞。卵母细胞发育至减数第二次分裂中期（或MⅡ中期）才能用于核移植。
(3) 将采集的猕猴胚胎组织块分散为单个的成纤维细胞，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。动物细胞在培养过程中，培养箱中CO2的作用是维持培养液的pH。
(4) 核移植后得到的是重组细胞，将重组细胞培养成重组胚胎离不开早期胚胎培养技术；重组胚胎需借助胚胎移植技术移入到受体动物的子宫里继续发育，才能得到克隆后代（克隆猴“中中”）。
(5) A、卵细胞大，便于操作，不是重组细胞能发育成新个体的原因，A错误；
B、卵细胞含有的营养物质多，可为早期胚胎发育提供营养，但不是重组细胞能发育成新个体的原因，B错误；
C、卵细胞的细胞质中合成与分裂、分化有关的物质能刺激融合后的重组细胞进行分裂分化，形成重组胚胎，可使体细胞核全能性得到表达，C正确； D、并非只有重组细胞才具有全能性，D错误。 故选C。
【点睛】本题以“世界上首只体细胞克隆猴‘中中’于2017年底在中国诞生”为情境，综合考查学生对核移植技术、动物细胞培养、胚胎移植等相关知识的识记和理解能力。解答本题需熟记并理解相关的基础知识并形成清晰的知识网络。在此基础上，结合问题情境，从图示和题意中提取有效信息进行相关问题的解答。
30.炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病，而噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌。对炭疽病疑似患者，可通过图1所示鉴定炭疸杆菌的实验进行确诊，回答下列问题：
（1）微生物生长所需的营养物质有水、无机盐、________。为从炭疽病疑似患者体内分离出炭疽杆菌，将采集到的患者皮肤脓胞渗出物稀释后取0.1 mL滴于培养基表面，用无菌_____________涂匀，这种接种方法称为涂布平板法。
（2）制备图1中的液体培养基时采取高压蒸汽灭菌法灭菌，锅内水加热煮沸后，必须
___________，以保证灭菌温度达到121℃。灭菌的目的是_____________。 （3）图2中接种工具的名称是________，灼烧后必须先将接种工具冷却的原因是____________________。
（4）据图1分析，接种可疑菌后，经35 ℃培养24小时，液体培养基变浑浊，对照组试管中应加入________，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组______________（填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。原理是实验组中_____，溶液变澄清。
【答案】 (1). 碳源、氮源、(和生长因子) (2). 涂布器(玻璃刮铲) (3). 将锅内冷空气彻底排除 (4). 杀死全部微生物，包括芽孢和孢子 (5). 接种环 (6). 避免高温杀死接种物 (7). 等量生理盐水 (8). 低 (9). 噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡 【解析】 【分析】
①为微生物的生长繁殖提供营养基质的是培养基；虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、无机盐、碳源和氮源，此外培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质及氧气的需求。②纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是指通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液用涂布器(玻璃刮铲)分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。③获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染。④依题意和分析图1可知：该实验的自变量为是否加入噬菌体。该实验的原理是：加入的噬菌体能够特异性地侵染炭疽杆菌，导致炭疽杆菌裂解死亡，使溶液变澄清。⑤图2中的接种工具是接种环。
【详解】(1) 微生物生长所需的营养物质有水、无机盐、碳源、氮源、(和生长因子)。采用涂布平板法接种微生物时使用的接种工具为涂布器(玻璃刮铲)。
(2) 用高压蒸汽灭菌法对液体培养基进行灭菌时，锅内水加热煮沸后，必须将锅内冷空气彻底排除，以保证灭菌温度达到121℃。灭菌的目的是杀死全部微生物，包括芽孢和孢子。 (3) 图2中的接种工具是接种环。为了避免高温杀死接种物，对于灼烧后的接种环，必须先将其冷却后才能用于划线操作。
(4) 接种可疑菌后，该菌大量繁殖，导致培养液变浑浊。图1显示：实验组加入的是用生理盐水配制的澄清噬菌体液，据此可推知：对照组试管中应加入等量生理盐水。加入的噬菌体
能够特异性地侵染炭疽杆菌，若该患者被炭疽杆菌感染，则培养液中的炭疽杆菌会因裂解死亡而使其数量下降，进而降低培养液的浑浊度，所以若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此实验的原理是：实验组中加入的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清。
【点睛】解答本题的关键是识记并理解培养基与微生物的营养、无菌技术的主要内容、微生物的纯化培养方法、对照实验等相关知识。在此基础上，结合问题情境，从题意和图示中提取有效信息进行相关问题的解答。
31.天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图：
（1）在酒精发酵阶段，若使用固定化酵母细胞，在溶化海藻酸钠时要进行________；酒精发酵过程中，发酵缸要处于______________状态。
（2）在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30天。工艺如下：
①发酵过程中，定期取样测定醋酸菌密度变化，趋势如上图。据图分析，与颠倒前相比，B 层醋酸杆菌在颠倒后密度变化的特点是______________________。
②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中，发酵缸中 ________________层的醋醅有利于乳酸菌繁殖，积累乳酸。
（3）下图表示温度、乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响。
①醋酸菌能将乙醇转变为_____，再将其转变为醋酸。
②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为____℃。
③酒精发酵后检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到_____左右才接种醋酸菌。 ④为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1mL发酵液稀释1000倍后，分别取0.1mL稀释菌液均匀涂布在4个平板上；经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为20、168、170、172，据此可得出每毫升发酵液中的活菌数为____________个。
【答案】 (1). 小火或间断加热 (2). 密封 (3). 先快速增长后趋于稳定 (4). 颠倒前的B层和颠倒后的A(或不翻动，或下) (5). 乙醛 (6). 35（30～35） (7). 4% (8). 1.7×106 【解析】 【分析】
①分析生产工艺流程图：糖化阶段是淀粉在淀粉酶以及麦芽糖酶的作用下水解产生葡萄糖的过程；果酒发酵是利用酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的原理，酵母菌属于兼性厌氧菌；果醋发酵的原理是：醋酸菌是一种好氧菌，当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将果汁中的糖分分解成醋酸，当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌可以先将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。②乳酸菌为厌氧菌。③分析分层固体发酵法的工艺流程图：颠倒前的A层和颠倒后的B层氧气含量多，颠倒前的B层和颠倒后的A层氧气含量少。④温度、乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响的曲线图显示，在温度为35℃、乙醇浓度为4%时，产酸量最高，温度低于或高于35℃、乙醇浓度小于或大于4%时，产酸量均会降低。
【详解】(1) 制备固定化酵母细胞，在溶化海藻酸钠时要进行小火或间断加热，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。酒精发酵，利用的是酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的原理，因此发酵缸要处于密封状态。
(2) ①醋酸菌是一种好氧菌，只有在氧气充足时才能够大量繁殖并产生醋酸。发酵过程中，A、B层颠倒后，B层醋酸菌获得的氧气较为充足，因此与颠倒前相比，B 层醋酸杆菌在颠倒后密度变化的特点是：先快速增长后趋于稳定。
②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。乳酸发酵是利用乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸的原理，因此发酵过程中，发酵缸中颠倒前的B层和颠倒后的A(或不翻动，或下)层醋醅有利于乳酸菌繁殖，积累乳酸。
(3) ①当氧气充足、缺少糖源时，醋酸菌可以先将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。 ②图1显示：在温度为35℃时，产酸量最高，因此研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为35（30～35）℃。
③图2显示：在乙醇浓度为4%时，产酸量最高，据此可知：酒精发酵后检测酒精浓度，将发
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