薄层色谱法标准操作规程

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题 目 制 定 制定日期 颁发部门 薄层色谱法标准操作规程 GMP办 审 核 审核日期 颁发数量 2 批 准 批准日期 生效日期 分发部门 质量管理部、综合办公室 引用标准：《中华人民共和国S药典》2005版一部

一．目 的：为规定薄层色谱法的检测方法和操作要求，特制定本操作规程 。

二．适用范围：适用于公司检品采用薄层色谱法的质量检测。 三．责 任 者：检验员 四．正 文：

定义：色谱法(又称层析法)根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色

谱、离子交换色谱与排阻色谱等。吸附色谱法是利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力的不同，用溶剂或气体洗脱使组分分离；常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。分配色语是利用被分离物质在两相中分配系数的不同使组分分离；其中一相被涂布或键合在固体载体上。称为固定相。另一相为液体或气体，称为流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。

离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上交换能力

的不同使组分分离；常用的有不同强度的阳离子交换树脂、阴离

子交换树脂，流动相为水或含有机溶剂的缓冲液。分子排阻色 语法又称凝胶色谱法，是利用被分离物质分子大小的不同导致在填料上渗透程度不同使组分 分离；常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微子L硅胶或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作为流动相。

色谱法又可根据分离方法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法。 1．原理：

薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 2．

仪器与材料

2．1薄层板

2．2点样器: 点样毛细管

2．3展开室 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有

严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 3．操作方法：

3．1点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，

点样基线距底边2.0cm，样点直径为2—4cm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

3．2展开 展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的

展开剂．并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0．5一1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中)，密封室盖，待展开至规定距离(一般为10一l 5cm)，取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

3．3 如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上

对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多。故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层板上展开后扫描，进行比较并计算含量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。 4．注意事项：

4．1点样点一般为圆点，不能太大。