医院检验科免疫室 人类免疫缺陷病毒抗文件编号： 体诊断试剂盒（酶联免生效日期： 年 月 日 疫法）标准操作规程 版本：第1版 第 页，共 页 1、 检验申请
单独检验项目申请：人类免疫缺陷病毒抗体{缩写抗HIV（1+2）]测定。临床医生根据需要提出检验申请。 2、 标本采集与处理 2.1标本采集
2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。 2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.5下列标本为不合格标本
2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。 2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存
2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的标本。 2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。 2.3标本采集的注意事项
采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
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医院检验科免疫室 人类免疫缺陷病毒抗文件编号： 体诊断试剂盒（酶联免生效日期： 年 月 日 疫法）标准操作规程 版本：第1版 第 页，共 页 3．方法原理
本实验采用HIV特异性抗原gp160和gp36等包被微孔反应板，用gp36、gp41标记辣根过氧化物酶。当待测标本中存在HIV抗体时，该抗体和固化的抗原结合于反应板上，并进一步与酶结合物相结合，在TMB底物参与反应的情况下，产生显色反应。 4．试剂及其他用品
4.1试剂：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒，由上海科华生物工程股份有限公司出品，试剂盒药品批准文号：国药准字S20010012(96人份)。未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。开启的包被反应板放入干燥剂密封后在2-8℃保存并尽快使用。
未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。微孔反应板打开包装后，应立即将未试用的板条装入有干燥剂的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。未使用完的酶结合物、阳性对照、阴性对照、洗涤液、显色剂A、显色剂B和终止液，在没有其他试剂污染的情况下，保存于原试剂瓶，并拧紧瓶盖，置2-8℃中避光保存，可使用至标签标识有效期。
4.2试剂盒组分
微孔反应板 抗-HIV阴性对照 抗-HIV-1阳性对照 抗-HIV-2阳性对照
酶结合物 显色剂A 显色剂B 终止液 洗涤液 （ 蒸馏水1：25稀释） 封片
说明书 4.3其他试剂及用品
加液器： 型号。 离心机： 型号。
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医院检验科免疫室 人类免疫缺陷病毒抗文件编号： 体诊断试剂盒（酶联免生效日期： 年 月 日 疫法）标准操作规程 版本：第1版 第 页，共 页 温箱（或水浴箱）： 型号。 洗板机： 型号。 酶标仪： 型号。 5．室内质控与室内质控规则
5.1质控品：采用卫生部临床检验中心临床免疫室免疫质控血清，浓度
NCU/ml。
5.2质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20℃冻存，复融后充分颠倒混匀。
5.3质控品测定：在每一次（板）标本中测定质控血清。 5.4质控规则：绘制质控图，求出SD和CV值。 6．标本检测步骤
（1） 洗涤液配制： 将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作1：25稀释。 （2） 加样：
每次实验设抗-HIV-1阳性对照孔2孔（每孔100μl），设抗-HIV-2阳性对照孔1孔（100μl）抗-HIV阴性对照孔1孔（100μl）。建议预留空白对照1孔（不加样本和酶结合物，只加底物和终止液）。剩余各孔加待测样本100 μl。用封片纸覆盖反应板后，将反应板置37℃孵育60分钟。 （3） 洗板：
手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30-60秒，甩干，
重复5次后，在干净的吸水纸是上拍干。
洗板机洗板：采用 洗板机洗板，选择洗涤5次程序，用配置的
工作浓度洗涤液注满每孔，每次工作浓度洗涤液在反应微孔中的停留时间为30-60秒，并确保每次吸净无残留，洗完后在干净的吸水纸上拍干。
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