不同pH条件下五倍子中没食子酸、单宁酸、β-PGG含量测定及分析

不同pH条件下五倍子中没食子酸、单宁酸、β-PGG含量

测定及分析*

周国丽1， 郑仕萍1， 杨晓红2， 郭 雪1， 范 源1△

【摘 要】摘要： 目的 研究及分析在不同的pH溶液中，五倍子中没食子酸、单宁酸、五没食子酰基葡萄糖(β-PGG)的含量变化。方法 将五倍子粉末分别加入pH为4，4.5，5，5.5，6醋酸盐缓冲液中，在95℃水浴条件下提取3.5 h，用反相高效液相色谱测定没食子酸、单宁酸、β-PGG的含量。结果 当pH等于4时，五倍子醋酸盐缓冲液的没食子酸含量最高；pH等于4.5时，单宁酸的含量最高；pH等于5.5时，β-PGG的含量最高。结论 在pH分别等于4、4.5、5.5的条件下，五倍子醋酸盐缓冲液中的没食子酸、单宁酸、β-PGG的含量最高。

【期刊名称】云南中医中药杂志 【年(卷),期】2014(035)012 【总页数】3

【关键词】 五倍子；醋酸盐缓冲液；β-PGG；没食子酸；单宁酸；HPLC；不同pH ·实验研究·

五倍子是我国传统中药，《本草纲目》记载五倍子性酸、咸、平、无毒，能敛肺降火，化痰饮，止咳嗽、止渴等[1]。临床研究表明五倍子具有清除自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒以及收敛等药理作用。五倍子含有丰富的鞣质成分，如β-PGG、没食子酸、单宁酸等，通常这些活性成分的提取方法有溶剂提取法[2-5]、水解法[6]等。为了研究五倍子提取的新实验方法，通过用不同pH醋酸缓冲液，

结合溶剂提取法提取五倍子中的β-PGG、没食子酸、单宁酸，测定并分析其含量变化。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 干燥五倍子。乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)，醋酸(分析纯)，醋酸钠，均购自云南丹赤贸易有限公司，纯净水。β-PGG标准品(购自成都普瑞法科技开发有限公司，批号：14021908)、没食子酸(购自云南昆明中检所，批号：110831-201204)、单宁酸标准品(成都迈斯克医药科技有限公司，批号：130721)。

1.2 仪器 DFY-600摇摆式高速万能粉碎机，D2KW-D电热恒温水浴锅，Agilent1200型高效液相色谱仪(VWD检测器)，分析天平，酸度计(OHAUS/奥豪斯，型号 STARTER 3100/F)。 1.3 方法

1.3.1 没食子酸、单宁酸、β-PGG对照品溶液的制备 精密称定没食子酸对照品0.25 mg，置10 mL容量瓶中，加入50%甲醇制成25 mg/mL的溶液，备用。精密称取0.30 mg单宁酸对照品，用乙醇、水、丙酮体积比为69.9%、29.8%、0.3%的溶液溶解并定容，制备成浓度为30 ug/mL的单宁酸标准溶液，备用。精密称定β-PGG对照品0.25 mg，置10 mL容量瓶中，加入甲醇制成25 ug/mL的溶液，备用。

1.3.2 β-PGG、没食子酸、单宁酸供试品溶液的制备 干燥五倍子粉碎，过80目筛，备用。精密称取5份五倍子粉末各约0.2 g分别置于250 mL带塞锥形瓶中，分别精密加入醋酸盐缓冲液40 mL，95℃水浴锅中加热水解3.5 h，冷却，过滤。精密量取续滤液1.5 mL于10 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，

均摇，即得供试品溶液。 1.3.3 没食子酸含量测定方法

1.3.3.1 没食子酸色谱条件 色谱柱 C18柱(4.6×250 mm，5 um，Digma)；以甲醇-0.2%磷酸溶液(5∶95)为流动相；检测波长为273 nm；柱温：25℃。 1.3.3.2 没食子酸线性关系考察 精密称取对照品2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，用50%的甲醇溶解定容至刻度，摇匀作为储备液。分别精密吸取0.1、0.5、1、2、4 mL于10 mL容量瓶中，50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即配制成浓度为1、5、10、20、40 ug/mL的标准溶液。按上述色谱条件进样20 uL，以没食子酸的峰面积(Y)对标准品的浓度(X)进线性回归，得方程y=114.7x+2.4554，r=0.9999，结果表明：没食子酸峰面积值与浓度有良好的线性关系，线性范围为1-10 ug/mL。

1.3.4 单宁酸含量测定方法

1.3.4.1 单宁酸色谱条件 C18柱(4.6×250 mm，5 um，Digma)；以甲醇-水(80∶20)为流动相；检测波长为275 nm；柱温：25℃。

1.3.4.2 单宁酸线性关系考察 精密称取对照品2.58 ug，置于10 mL容量瓶中，用乙醇、水、丙酮体积比为69.9、29.8、0.3%的溶液溶解并定容至刻度，摇匀作为储备液。按上述单宁酸色谱条件分别取2、4、6、8、10 uL不同体积进样，以单宁酸的峰面积(Y)对标准品的质量(X)进行线性回归，得方程y=5719.5x-1924.8，r=0.9974，结果表明：单宁酸峰面积值与质量有良好的线性关系，线性范围为0.516-2.58ug。 1.3.5 β-PGG含量测定方法

1.3.5.1 β-PGG色谱条件 色谱柱 C18柱(4.6×250 mm，5 um，Digma)；流