使用RNA作为起始材料：用于RT-PCR和RT-qPCR的Thermo Scientific解决方案

使用RNA作为起始材料：用于RT-PCR和RT-qPCR的Thermo Scientific解决方案 首先将目的RNA逆转录为cDNA，再用传统的终点法PCR或实时定量PCR (qPCR)对cDNA进行扩增。Thermo Scientific提供一系列逆转录酶(RTs)，可以满足您常规的和更高的实验要求，其中包括经遗传修饰的M-MuLV RT酶和通过M-MuLV RT酶体外进化得到的酶。 RT 酶选择指南

您可以从下表中选择适合的RT酶或第一链cDNA合成试剂盒。

*为了分析人和小鼠中的基因表达，我们提供简便的，预设计的Solaris qPCR Gene Expression Assays *

请参见应用文章：人和小鼠基因表达分析——预设计的定量检测试剂 Transcriptase 常规性能 RevertAid Reverse RevertAid H Minus Reverse Transcriptase RevertAid Premium Reverse Transcriptase 应用 RT-PCR up to 5 kb RT-PCR 5 - 20 kb 全长cDNA 5 ~ 20 kb cDNA 标记 RACE/引物延伸 特性 最佳反应温度 最高活性温度 读取长度 RNase H活性 灵敏度 (总RNA) 失活 反应时间 产品形式 **** ** ** ** * 42°C 50°C 13 kb 是 0.1 ng 70°C, 10 min 反应时间60 min **** *** *** *** ***** 42-45°C 55°C 13 kb 否 0.1 ng 70°C, 10 min 60 min ***** ***** ***** ***** ***** 50-55°C 60°C 20 kb 否 1 pg 85°C, 5 min 30 min ***** ***** ***** **** ** 50-55°C 65°C 20 kb 是 1 pg 85°C, 5 min 15-30 min 增强性能 Maxima Reverse Transcriptase 酶，提供缓冲液 参见RevertAid Reverse 参见RevertAid H Minus Transcriptase Reverse Transcriptase 参见RevertAid Premium Reverse Transcriptase 参见Maxima Reverse Transcriptase 第一链cDNA合成试参见RevertAid First 剂盒 Kit 参见RevertAid H Minus Synthesis Kit 参见RevertAid Premium First Strand cDNA Synthesis Kit 参见Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR Strand cDNA Synthesis First Strand cDNA 用于RT-PCR的解决方案

RT-PCR是一种快速灵敏的方法，可用于分析基因表达，检测转录子是否存在,或制备克隆用的cDNA模板。RT-PCR有两种方法：一步法和两步法。

一步法RT-PCR的优点

? 使用序列特异性引物，逆转录反应和PCR反应在同一试管中进行 ? 最大程度地减少了操作时间 ? 降低了污染风险

? 可以同时运行多个反应，适用于RNA样品的高通量筛选

推荐产品：Verso 1-Step RT-PCR Kits 两步法RT-PCR的优点

? 第一链cDNA的合成和后续的PCR反应是分开进行的

? cDNA合成和PCR反应可以分别进行优化，以获得更长的扩增子、更强的保真度或更高的灵敏度

? 随机引物、oligo(dT)引物或序列特异性引物均可用于合成第一链cDNA ? 一个RT反应可以分析多个转录本 ? 以cDNA的形式储存样品，更加可靠

推荐产品：Maxima Reverse Transcriptase 或 RevertAid Premium Reverse

Transcriptase

Phusion PCR

高保真DNA聚合酶：可获得最理想的PCR结果

酶的完整列表

Phusion RT-PCR Kit--用于两步法高保真RT-PCR的完整试剂盒 用于RT-qPCR的解决方案

定量逆转录PCR (RT-qPCR)已经成为分析基因表达和测定病毒载量的理想工具。逆转录反应(mRNA→cDNA)对于精确且灵敏的定量检测是至关重要的，因为逆转录生成的cDNA的量与起始RNA的量相对应。成功的cDNA合成取决于模板RNA的完整性和纯度，以及优化的反应条件。高质量的Thermo Scientific RT-qPCR 试剂能确保实验的可靠性。

一步法RT-qPCR的优点 ? 移液步骤更少 ? 降低了污染的风险 ? 适合于高通量扩增

推荐产品：Verso 1-Step RT-qPCR Kits 两步法RT-qPCR的优点 ? 独立的RT和qPCR反应 ? 两个步骤均可优化反应条件

? cDNA易于保存，以用于多个qPCR反应

推荐产品：用于RT的推荐产品——Maxima First Strand cDNA Synthesis Kit 用于qPCR的推荐产品：Maxima SYBR Green qPCR Master Mixes

Maxima Probe qPCR Master Mixes

用于快速：DyNAmo Flash SYBR Green qPCR Kit

DyNAmo Flash Probe qPCR Kit

DyNAmo ColorFlash SYBR Green qPCR Kit DyNAmo ColorFlash Pobe qPCR Kit

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用于预设计的人和小鼠基因的qPCR检测：

Solaris qPCR Gene Expression Assays Solaris qPCR Gene Expression Maste Mixes Verso cDNA Synthesis Kit

*使用RiboLock RNase Inhibitor来防止RNA的降解*