定核苷酸序列变化后，就不能被相应限制酶识别。
答案：(1)有特定脱氧核苷酸序列的DNA片段 (2)两种不同的限制酶
(3)黏性末端 平末端 G、A A、T
(4)能识别双链DNA分子的特定脱氧核苷酸序列，并从特定的位点将DNA分子切开 (5)限制酶不能识别切割位点
7．在DNA重组技术中使用的工具酶是( ) A．限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B．DNA水解酶和DNA连接酶 C．限制性核酸内切酶和DNA聚合酶 D．DNA聚合酶和DNA水解酶
解析：基因工程中使用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶。 答案：A
8．某种线性DNA含有限制性核酸内切酶EcoRⅠ的1个酶切位点。该DNA样品(甲)经
EcoRⅠ酶切后，在DNA连接酶催化下形成产物乙(如图)，则反应液中产物乙共有( )
A．1种 C．3种
B．2种 D．4种
解析：根据题意可知，线性DNA含有限制性核酸内切酶EcoR I的1个酶切位点，因此经过该酶切割后会形成两个相同的黏性末端，但是黏性末端两侧的序列不同，可以分别用a和b表示。由于a和b具有相同的黏性末端，因此利用DNA连接酶催化后，能够产生aa连接、bb连接、ab连接三种产物。
答案：C
9．据图所示，有关工具酶功能的叙述错误的是( )
A．限制酶可以切断a处 B．DNA聚合酶可以连接a处 C．解旋酶可以使b处解开 D．DNA连接酶可以连接c处
解析：限制酶切割DNA分子时破坏的是DNA链中的磷酸二酯键，如图a处。DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键，因此DNA聚合
酶可以连接a处。解旋酶解开两个碱基对之间的氢键，即b处解开。DNA连接酶连接的是两个相邻的脱氧核苷酸的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键，如a处，而图示的c处连接的是同一个脱氧核苷酸内的磷酸和脱氧核糖。
答案：D
10．质粒是基因工程中最常用的目的基因运载工具。下列有关叙述正确的是( ) A．质粒是只存在于细菌细胞质中能自主复制的小型环状双链DNA分子 B．在所有的质粒上总能找到一个或多个限制酶切割位点
C．携带目的基因的重组质粒只有整合到宿主细胞的染色体DNA上才会随后者的复制而复制
D．质粒上的抗性基因常作为标记基因供重组DNA的鉴定选择
解析：质粒不只分布于原核生物中，在真核生物——酵母菌细胞内也有分布，A项错误；并不是所有的质粒都能找到限制酶的切割位点而成为合适的运载目的基因的工具，B项错误；重组质粒进入受体细胞后，可以在细胞内自我复制，也可以整合后复制，C项错误；质粒上抗性基因常作为标记基因，D项正确。
答案：D
11．如图为某基因工程中利用的质粒简图，小箭头所指分别为限制酶EcoR I、BamH I的酶切位点，amp为青霉素(抗生素)抗性基因，tet为四环素(抗生素)抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoR I、BamH I在内的多种酶的酶切位点。
R
R
据图回答下列问题：
(1)在基因工程中常用的工具有三种：一是用于切割DNA分子的________；二是将目的基因与载体拼接的________；三是作为载体的质粒。
(2)将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的载体(质粒)进行拼接形成重组DNA，理论
上
讲
，
重
组
DNA
可
能
有
“________________”“________________”“____________________”三种，其中有效的(所需要的)重组DNA是________________。因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
(3)利用图示的质粒拼接形成的三种拼接产物(重组DNA)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物(重组DNA)是_____________________。
解析：(1)在基因工程中常用的工具酶有两种：一是用于切割DNA分子的限制酶，二是将目的基因与载体连接的DNA连接酶。(2)用同一种限制酶将含有目的基因的DNA和质粒分别切开，产生的黏性末端相同，进行拼接形成的重组DNA，理论上讲，可能有目的基因—目的基因、目的基因—载体和载体—载体三种。其中人们所需要的重组DNA是目的基因—载体。(3)由图可以看出两种限制酶的酶切位点都在四环素抗性基因中，两种限制酶都能破坏四环素抗性基因，因此用该质粒拼接形成的三种拼接产物(重组DNA)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物应是载体—载体(仍有抗性基因)。
答案：(1)限制酶(限制性核酸内切酶) DNA连接酶
(2)目的基因—目的基因 目的基因—载体 载体—载体 目的基因—载体 (3)载体—载体
12．如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。
(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是__________，二者还具有其他共同点：如①_____________，②_____________(写出两条即可)。
(2)若质粒DNA分子的切割末端为
—A—TGCGC
，则与之连接的目的基因切割末端应为
____________；可使用____________把质粒和目的基因连接在一起。
(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为________________， 其作用是______________________________________________ ______________________________________________________。 (4)下列常在基因工程中用作载体的是( ) A．苏云金芽孢杆菌抗虫基因 B．土壤农杆菌中的RNA分子 C．大肠杆菌的质粒 D．动物细胞的染色体
答案：(1)DNA 能够自我复制 具有遗传效应
(2) DNA连接酶
(3)标记基因 供重组DNA的鉴定和选择 (4)C
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