本科生毕业设计（论文）
题 目学 院 业 姓 名指导教师
甲醇在白斑狗鱼精液冷冻保存中的应用研究
动物科学学院
动物科技与生
产管理
班级 动科062
李帅 学号
053531230
张俊杰
职称
讲师
年 月 日
新疆农业大学教务处制
专
目 录
摘要……………………………………………………………………………………错误！未定义书签。 前言……………………………………………………………………………………2 1 材料与方法…………………………………………………………………………2 1.1 实验材料………………………………………………………………………2 1.1.1 亲鱼的选择…………………………………………………………………2 1.1.2 实验环境……………………………………………………………………2 1.2 实验方法………………………………………………………………………2 1.2.1精液稀释液的配制…………………………………………………………2 1.2.2精液的采集…………………………………………………………………2 1.2.3 精液的冷冻保存……………………………………………………………3 1.2.4 卵子的采集与保存………………………………………………………3 1.2.5伊红染色检测精子活率…………………………………………………3 1.2.6人工授精和孵化……………………………………………………………3 1.2.7 苗种培育……………………………………………………………………3 1.3数据分析………………………………………………………………………3 2 结果与分析…………………………………………………………………………3 2.1甲醇添加水平对冻精精子活率的影响………………………………………3 2.2甲醇添加水平对冻精相对受精率的影响……………………………………3 2.3 10%甲醇稀释液冻精繁殖苗种生长性状………………………………………4 3 讨论…………………………………………………………………………………4 3.1白斑狗鱼的精液冷冻保护剂的选择…………………………………………4 3.2白斑狗鱼精液稀释液对精子活率的影响……………………………………4 3.3甲醇对受精率的影响…………………………………………………………4 3.4甲醇对冻精受精卵孵化出的鱼苗生长性状的影响…………………………5 4结论…………………………………………………………………………………5 谢 辞…………………………………………………………………………………6 参考文献………………………………………………………………………………7
甲醇在白斑狗鱼精液冷冻保存中的应用研
究
摘要：为了研究甲醇在白斑狗鱼精液冷冻保存中的最适添加水平，本文采用0.5ml的麦管和液氮表面降温法研究了甲醇的四种不同添加水平对白班狗鱼冻精精子活率、受精率以及繁殖苗种生长情况的影响。实验研究结果表明，添加有10%甲醇的冻精获得了最高的相对精子活率和受精率，利用该组冻精繁殖出的鱼苗在早期培育阶段与新鲜精液繁殖出来的苗种在成活率、体重和体长方面都没有显著性差异。
关键词：白斑狗鱼；甲醇；冷冻保存；精子活率；受精率；苗种培育
The application study of methanol in
cryopreservation of Esox lucius sperm
Summary：In order to study the methanol in Esox lucius’s semen cryopreservation of optimum adding level, this paper uses the 0.5 ml straw and liquid nitrogen’s surface cooling method to study the influence of the methanol of four different levels to add frost fine work days pike sperm Fertilization rate, and the living conditions of the reproductive growth seedling. Experimental results show that add a 10% of methanol pure won the highest freezing semen live Fertilization rate and relatively pure breed, triple-frequency undifferenced observables frozen out in early stage and cultivate encouraged fresh semen bred in survival rate, weight and body length are no significant differences..
Key words: Esox lucius; Methanol；Cryopreservation;Motility rate; Fertilization rate;Nursing techneques of mandarin fish larvae
白斑狗鱼(Esox lucius)属鲑形目（Salmoniformes）、狗鱼亚目（Esocoidei）、狗鱼科(Esocidae)、狗鱼属(Esox),在我国境内仅分布于新疆额尔齐斯河流域，白斑狗鱼喜栖息于有支流的河道中，通常生活于水草丛生的沿岸地带，属大型肉食性凶猛鱼类，生长速度快，食性以鱼为主，其肉质坚韧少刺，口味鲜美，营养价值高，是一种畅销且具有发展前景的淡水增养殖品种[1,2]。白斑狗鱼过去一直是天然捕捞对象，由于受水土开发、过度捕捞等因素影响，其自然资源量急剧减少。因此，研究和开发白斑狗鱼精液冷冻保存技术对其增养殖业的发展和种质保存具有重要意义。
精液冷冻保存技术开始于20世纪50年代初，其范围属于低温生物学。目前，常用的冷冻保护剂主要有二甲亚砜、甲醇、乙二醇和甘油等。近年来大量的研究表明甲醇是一种更为有效的冷冻保护剂，在对大西洋鲑和里海斑鳟精液的研究表明10%甲醇的保护效果都优于5%或10%的DMSO的效果[3,4]。
关于白斑狗鱼精液冷冻保存技术开始于1978年[5]，1995年添加有10%蛋黄的Erdahl & Graham氏液作为精液稀释液获得74.5%的受精率[6]，随后只含有0.6 M 蔗糖 和15% 二甲亚砜的精液稀释液被证明更加有效（孵化率达77.3%）[7]。2000年又开发利用10%甲醇作为冷冻保存剂，含有9种成分的精液稀释液[8]。最近一种利用10%甲醇作为冷冻保存剂，含有0.3 M葡萄糖、10% 蛋黄和1.7 g/L
[9]
KCl的精液稀释液获得92.2%的受精率。但是甲醇在白斑狗鱼精液稀释液中最适添加水平的研究未见报道。
本文采用0.5毫升麦管和液氮表面降温法研究甲醇的不同添加水平对白斑狗鱼冻精精子活率、受精率的影响，以及10%甲醇的稀释液对繁殖苗种生长性状的影响，开发出更好的精液冷冻保存技术，为生产应用和种质保存服务。
1 材料与方法
1.1 实验材料 1.1.1 亲鱼的选择
实验所用白斑狗鱼亲鱼为北园春市场出售的额尔齐斯河野生白斑狗鱼，挑选身体健康且发育成熟的雄鱼7条，雌鱼4条。 1.1.2 实验环境
实验场所选择在新疆农业大学水产实验基地，亲鱼培育的水温为11℃，养殖场所光线比较暗，同时采取必要的避光措施，尽量避免光线对精子的杀伤，减少实验结果的误差。 1.2 实验方法
1.2.1 精液稀释液的配制
分别以0、5、10、15%的甲醇(MeOH)作为冷冻保护剂,以0.3M的葡萄糖作为基础溶液的主要成分，再添加10%的蛋黄、1.79 g/L的KCl，配制出四种不同的白斑狗鱼精液稀释液。 1.2.2 精液的采集
白斑狗鱼精液采集按照F Lahnsteiner等人[10]的方法进行。采精前先把雄鱼体表的水用干毛巾擦干，用剪刀将鱼体剪开后取出精巢，用干纱布吸完精巢表面的液体后用纱布包裹，然后用手进行挤压，将精巢内的精液挤入干燥小烧杯中，整个过程要防止精液接触水分。采精后在显微镜下进行精子浓度和活力的检查，将浓度适宜且活力旺盛的3条雄鱼精液置于冰盒内，闭光储存待用。在人工授精
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