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RNA 聚合酶核心酶分子或不同种的 RNA 聚合酶分子识别。
13．原核生物的核糖体 RNA 和 tRNA 相对较稳定并且半衰期长，而 mRNA 却不稳定，很快被降解。 请
解释这种稳定性的差异。 答：
如果 mRNA 的寿命很长，就不可能通过控制 mRNA 的合成速度调节基因的活性； 如果的 rRNA 和 tRNA 寿命长，就会更经济。
14．一个 tRNA 基因的启动子序列突变将会分别对①基因产物和②细胞或生物体的表型有什么影
响？ 答：
（1）因为 RNA 聚合酶 III 的启动子位于基因内，启动子序列的变化，将会改变前体 tRNA 的 核苷酸序列；
（2）可能没有，因为 tRNA 基因是过剩的。
15．列举原核生物同真核生物转录的差异。
原核生物 1、一种 RNA 聚合酶 2、不同启动子具相当大的同源性 3、聚合酶直接与启动子结合 4、没有增强子 5、转录作用的终止由在几个多聚 U 前面形成茎环 真核生物 1、三种 RNA 聚合酶 2、不同启动子的差异大 3、聚合酶通过转录因子相互作用进行结合 4、有增强子 5、转录的终止是靠转录过程特殊的核酸内切酶切 割的序列介导 6、聚合酶 III 的启动子位于被转录的序列之中 7、转录单位只含一基因 6、启动子通常位于基因的上游 7、转录单位常常含有多基因 16．增强子具有哪些特点？ 答：
（1）增强相邻启动子的转录；
（2）两个方向都能起作用；
（3）位于相邻启动子的上游或下游都能起作用；
（4）在远距离外也能起作用；
（5）具有细胞类型的特异性。
17．哪些转录因子含有 TBP？为什么它们被称为定位因子？请用一个模型解释为什么所有三种 RNA
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聚合酶都能与 TBP 发生作用？ 答：
TBP 是聚合酶 I 因子 SL1、聚合酶 II 因子 TFIID 和聚合酶 III 因子 TFIIIB 的组成成分。所以这 些蛋白都能帮组 RNA 聚合酶定位于起始位点的附近。TBP 可能与这三种聚合酶都具有的一个亚 基相互作用。
18．什么是转录起始前复合体？ 答：
前起始复合体包含与 RNA 聚合酶相结合所必需的基本转录因子。
19．RNA 聚合酶 III 的内部启动子位于起始位点下游 50 个核苷酸的位置，它是如何被定位并正确
起始转录的？ 答：
TFIIIA 和 TFIIIC 因子结合于 RNA 聚合酶 III 的内部启动子上并吸引 TFIIIB 结合到起始位点 上游的一个位点，接着 TFIIIB 将 RNA 聚合酶 III 定位到起始位点。 20．对带有内部启动子的 RNA 聚合酶 III 基因有什么样的编码限制因素？ 答：
A、B、C 盒必须能够被与之结合的 RNA 聚合酶 III 的转录因子所识别。因此它们与共同序列不 能相差太大。因为这些元件就位于 RNA 聚合酶 III 转录物的编码区内，所以它们限制了该区域 内的转录物的编码能力。
21．当一段活性转录 DNA 受损时，模板首先被修复。请用一下模型解释这一现象。 答：
TFIIH 以两种形式存在：激活复合物和修饰复合物。在转录起始之后，激酶形式被修饰酶形式 所代替。当遇到受损的 DNA 时，RNA 聚合酶活性下降。这可能成为激活 TFIIH 修复活性的信 号。 22．酵母 U6 sRNA 基因有一个 TATA 框位于上游，在基因内有一个弱的 A 框，基因下旅游的远端 还
有一个保守的 B 框。体外实验时，RNA 聚合酶 II 和 III 都可以转录这个基因，但体内实验发 现只有 RNA 聚合酶 III 可放转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性？ 答：
A 框和 B 框结构 TFIIIC，TFIIIC 能够吸引 TFIIIB。TFIIIB 中的 TBP 与 TATA 框的相互作用 帮助 TFIIIB 稳定结合于上游区域。如果 A、B 框位于正确的位置并能很好地互相匹配那就不需 要 TATA 框了。
23．举例说明单链核酸中形成茎环结构的重要性。
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答：
单链核酸形成的茎环结构是固有的转录终止子，例如，RNA 中的茎环结构。
24．用负超螺旋环状 DNA 样品进行体外转录实验。但是预实验中并没有获得满意的结果，试讨论 改
进实验的可行方法。 答：
由于 DNA 是高度卷曲所以不能有效转录，改进的办法是加入 DNA 促旋酶，可以去除负超螺旋， 使 DNA 处于松驰状态，就可以进行转录实验。
25．组蛋白 H2A 基因在所有细胞中都进行表达，而免疫球蛋白基因只在淋巴样细胞中表达。两类基 因
的启动子都含有转录因子 Oct-1 的结合点，Oct-1 也存在于这两类细胞中，但为什么免疫球蛋 白只在淋巴样细胞中表达？ 答：
免疫球蛋白基因的表达需要只在淋巴细胞中具有的 Oct-2 或其他的转录因子，而单独一个转录因 子往往不足以活化基因，同时必须考虑整个启动子。只有 DNA 重排在启动子的作用范围内产生 一个下游增强子之后，免疫球蛋白才能被完全激活。
26．RNA 聚合酶 II 起始转录后，起始复合的必须转变为延伸复合物。因此聚合酶合物必须解旋一 小
段 DNA。在线性 DNA 上，解旋需要 ATP、TFIIE、TFIIH 和解决旋酶活性。然而，超螺旋 DNA 的转录并不需要这些因子。请解释这一现象。 答：
对于线性 DNA，TFIIE、TFIIH 和 ATP 是聚合酶 II 复合体前方的 DNA 解旋所必需的。这些 因子并不是超螺旋 DNA 转录所必需的，因为它们只在负超螺旋的解旋中活性较高。 27．RNA 聚合酶 III 特异性地转录小分子 RNA，但为什么不转录 5.8S rRNA？
答：
5.8S rRNA 是作为前体 rRNA 大分子的一部分被转录的。
28．当剪接的分支位点被移到内含子内的另一个位置，其活性将会消失。相反，正确位置附件隐藏 的
一个分支位点被激活，请做出解释。 答：
分支位点位于疏松的剪接共有序列中。它最早发现于多聚嘧啶区和 3′剪接位点附近。当一个真 正的分支位点从多聚嘧啶区和 3′剪接位点移走之后，它将不能被 U2 snRNP 所识别。这时多聚 嘧啶区附近的 A 残基起分位点的作用。
29．请列举剪接体组装过程中的各个步骤，其中哪一个复合物是具有活性的剪接体？ 答：
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http://www.bbioo.com/ky/ 在剪
接体组装中，U1 snRNP 结合于 5′剪接位点，U2AF 结合于多聚嘧啶序列上。U2 snRNP 结合于分支位点形成 A 复合物。接着加上 U4/U6-U5 三聚体形成 B1 复合物。snRNP 的重排形 成 B2 复合物（U5 从外显子转移到内含子上，U6 在 5′剪接位点代替 U1）。进一步的 snRNP 重 排形成 C1 和 C2 复合物（释放 U4，U6/U2 形成催化中心），它们是剪接体的活化形成。 30．U5 snRNP 与 5′剪接位点间作用的基础是什么？如何证明？ 答：
U1 与 5′剪接位点通过 U1 RNA 的 5′端与 5′剪接位点保守序列以 RNA-RNA 碱基配对形式相 互作用。这可以两方面进行证明：一是在 5′剪接位点制造一个破坏与 U1 进行碱基配对的突变 可抑制剪接；第二是在 U1 RNA 中设计一些能够恢复碱基配对的突变使剪接得以进行。U1 RNA 对 5′剪接位点突变的补偿性突变能够恢复剪接，令人信服地证明这些 RNA 是通过碱基配对互 相作用的。
31．列举前 mRNA 剪接过程中发生的 6 种 RNA-RNA 相互作用？ 答：
U1-5′剪接位点、U2-分支位点、U4-46、U2-U6、U6-5′剪接位点、U5-外显子。
32．通过遗传筛选，在酵母中分离得到许多与前 mRNA 剪接有关的基因。其中几个基因编码 RNA
解旋酶。如何解释前 mRNA 剪接需要多个 RNA 解旋酶？这些酶可能在哪一步反应中起作用？ 答：
剪接小体的组装包括很多 RNA 螺旋的形成和解旋过程，RNA 螺旋的解旋需要 RNA 解旋酶的作 用。剪接小体组装的时的 snRNA 重组（如 U4 和 U6 的去组装）需要这些酶。
33．前 mRNA 剪接体的催化中心是什么？它是如何形成的？有什么证据可以证明这个模型？ 答：
催化中心由 U2 和 U6 RNA 及内含子组成。它形成于装配的剪接小体 C 复合物中。由 U2-U6 配 对形成的二级结构看起来与 II 组内含子的结构域 5 相似。
34．据说前 mRNA 的剪接是从 II 组剪接进化而来的。有什么证据可以证明这一点？是如何发生的？ 这
种进化为什么对生物体有利？ 答：
II 组内含子和前 mRNA 的剪接有着相同的反应机制、相同的剪接位点，在催化中心形成相同的 二级结构。前 mRNA 内含子可能由 II 组内含子进化而来。在进化过程中，II 组内含子中被切除 的结构域插入到分隔的基因中，这些结构域呆能成为 snRNA。它们通过分开片段的相互作用形 成 II 组内含子的催化中心。这对生物体来说是有利的，因为它们不再需要内含子了。内含子序 列可以自由地进化形成新基因，而且它提供了多种 II 组内含子不具备的剪接方式。
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