组内脏和骨骼畸形可暂不检查，但需保存标本以备查。
结果报告：
1. 用适当的统计方法处理资料，注意亲体和胚胎、胎仔数据分析时采用的单位（窝或个体）。判断实验结果应充分考虑统计学意义、生物学意义和历史背景资料。
2. 评估亲体无毒性反应的剂量水平（A）和胚胎无发育毒性的水平（D）。当受试品A/D>1时，可视为受试品有胚胎-胎仔毒性。
三、 围产期毒性试验
主要评价受试物对亲体、胎仔出生前后、幼仔生长发育、功 能、行为、性成熟和生殖功能的影响。
动物：至少一种动物，通常用大鼠或小鼠。每组的动物数足够统计 处理。一般每个剂量组16~20只。
给药期限：大鼠、小鼠妊娠D15开始给药至分娩后D28（大鼠）和 D21（小鼠）。
实验：观察亲体给药后分娩、抚养仔代的能力，以及幼仔生长发育 和其他功能的状况，包括对生殖能力的评价。观察过程中， 幼仔剔除多少，何时剔除，可参考文献资料和本实验室的经 验，但所留的动物数足够进行统计处理。 观察项目：
实验期 症状和死亡至少一天观察一次
体重和体重增长变化至少每周观察2次 摄食量每周观察一次到分娩 其他有意义的毒性反应 妊娠期限 分娩情况 哺乳抚养情况
终末处死 交配成功但未分娩大鼠於妊娠D25剖腹检查（小鼠 为D23），若肉眼未观察到子宫上着床点时，需用 硫化胺染色检查。分娩大鼠於分娩后D28剖腹检查 着床点数和位置以及大体损伤。
子代检查 出生时每窝胎仔数，包括 存活、死亡和畸形胎仔
幼仔哺乳期（分娩后D1~D21）存活率、行为症状
观察
体重。包括出生时、哺乳期和离乳后的体重。 离乳后耗食量
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身体发育
感觉、运动、学习和记忆功能 反射行为
生殖功能
结果报告：
1. 用适当的统计方法处理资料，注意亲代、胎仔和幼仔数 据分析时采用的单位（个体或窝）。判断实验结果应充 分考虑统计学意义、生物学意义和历史背景资料。 2. 评估亲体无毒性和无围产期毒性的剂量水平。
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致突变试验
受试物的化学结构，理化性质及对遗传物质作用终点的不同，需用多种试验方法检测不同的遗传毒性的终点，才能合适地评价各种化合物的遗传毒性。因此提出一组试验作为标准试验组合评价受试物的遗传毒性。包括：细菌回复突变试验，哺乳动物培养细胞染色体畸变试验和啮齿类动物微核试验。必要时再补充相关的试验，以充分评价药物可能的遗传毒性。 一、 细菌回复突变试验
菌株：组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌（S. Typhimurium）和修复缺陷型大肠杆菌（E. Coli）。实验采用下列菌株： 1）TA98 2）TA100 3）TA1535
4）TA1537或TA97A或TA97a
5）TA102或E.coli wp2 uvra或E.coli uvra(PKM101)
所有菌株，经鉴定符合要求，-80C或液氮冻存备用。
剂量：要求进行剂量选择的预试验。预试验包括所有菌株加S9和不加S9的实验，并设阳性和阴性对照。旨在确定剂量范围和将结果与主实验比较。剂量由毒性或溶解度确定。极限溶度5mg/皿或5μl/皿，最低溶度0.1~1μg/皿。 剂量级：5 个以上。
剂距：剂距约为0.5或11g。 细菌数：约108活菌/皿。
代谢活化：常用大鼠等啮齿类动物制备S9 。诱导剂可用Aroclor1254 或苯巴比妥加β-萘黄酮（β-naphthanone）复合诱导。
试验报告中应说明大鼠的种系、性别，并叙述制备方法和蛋白含量。S9必须进行体外阳性对照品代谢活性试验，证明其活性。实验应在加S9mix和不加S9mix平行条件下进行测试。
对照： 了阴性、阳性对照和S9对照是必要的。原则上阴性对照为
溶剂对照，若本实验室历史资料表明所用溶剂无诱变作用可不设空白对照组，否则应另设空白对照。阳性对照品和浓度的选择，可根据文献或自己实验室的背景资料决定。
方法： 标准平皿掺入法或预培养法均可使用，预培养在37C下孵
育20-60分，培养时间48小时，观察结果。若菌落太小，可继续培养延长至72小时观察结果。每一浓度至少3皿，
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若阴性结果明确，且预试验与主试验结果相符，可不再重复。
阳性结果的判断：
用适当统计学方法处理实验资料。符合下列条件之一：有
统计学意义、与剂量有关的突变率增高；或至少一个测试点有统计学意义、可重复的突变率增高，即可判为阳性结果。
注：
1. 结果可疑时，可改变实验方案复核。或变换标准平皿掺入/预培养法，或改变S9的浓度，或改用不同动物制备的S9。也可选择哺乳动物培养细胞位点突变试验进行复核。
2. 一些不适宜进行细菌突变试验的化合物。对细菌高毒性的化合物（如抗菌素类），干扰哺乳动物细胞复制系统的化合物（如拓扑异构酶抑制剂，核苷的类似物或DNA代谢的抑制剂），或含组氨酸的药物。可选用哺乳动物细胞L5178 Y/tk，CHO/hprt，V79/hprt，AS52/gpt中一项作替代试验。首选L5178Y细胞tk分析。 二、 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验
细胞：中国仓鼠肺细胞（CHL）、中国仓鼠卵巢细胞（CHO）人外
周血淋巴细胞均可使用。细胞株需经常检查核型和有无支原体污染等。-80C低温冰箱或液氮中保存。
代谢活化：常用大鼠等啮齿类动物肝脏制备S9。诱导剂可用 Aroclor1254或苯巴比妥与β-萘黄酮（β-
naphthoflavone）复合诱导。 试验报告中应说明大鼠的 种系、性别，并叙述制备方法和蛋白含量。S9mix的配方 可根据文献或本实验室的背景资料自行决定。S9在培养
液中最终浓度范围1%~10%（v/v），但必需证明阳性对
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照品明显活化。
实验应在加S9mix和不加S9mix平行条件下进行测试。 剂量：浓度取决于受试物的毒性和溶解度。极限浓度不宜超过 10mM或5mg/ml（未知分子量的化合物或混合物）。
溶解度差而毒性低的化合物，最高浓度受试物可在培养液中
呈现沉淀以证明溶液饱和。若可能则应测培养液中受试物的最终浓度。因毒性不能提高浓度的化合物，应测试该化合物的毒性，高剂量以50%细胞生长抑制浓度为基准。人外周血淋巴细胞的毒性可用抑制有丝分裂指数（MI）表示，高剂量
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