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动物肝脏中DNA的提取及检测实验报告

来源:用户分享 时间:2025/5/29 6:58:42 本文由loading 分享 下载这篇文档手机版
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么作用?

答:①柠檬酸的钠盐在实验中既充当DNA酶的抑制剂,也是pH缓冲溶液;

②SDS是表面活性剂,可以让蛋白质与DNA分开; ③氯仿是有机溶剂,可以使蛋白质聚集沉淀,便于分离出去; ④异戊醇是消泡剂,可以减少泡沫的发生; ⑤氯仿-异戊醇的作用是使蛋白质变性、膜溶解; ⑥NaCl固体溶解使得试液成为高浓度的盐溶液,在这样的

环境中DNA核蛋白能溶解,RNA核蛋白则溶解度很低,可以利用这一性质分离两种核酸。

八、实验注意事项

1.DNA主要集中在细胞核中,因此,通常选用细胞核含量比例大的生活组织作为提取制备DNA的材料,小牛胸腺组织中细胞核比例较大,因而DNA含量丰富,同时其脱氧核苷酸酶活性较低,制备过程中DNA被降解的可能性相对较低,所以是制备DNA的良好材料,但其来源较困难,脾脏或肝脏易获得,也是实验室制备DNA常用的材料,本实验用新鲜肝脏作为实验材料。

2.为了防止大分子核酸在提取过程中被降解,须采取以下措施:整个过程必须在低温下进行,可加入某些物质抑制核酸酶的活性,如柠檬酸钠、EDTA、SDS等,EDTA是抑制核酸酶的活性最好的抑制剂。

3.从核蛋白中脱去蛋白质的方法很多,经常采用的有:氯仿-异

丙醇法、苯酚法、去垢剂法等,他们均能使蛋白质变性和核蛋白解聚,并释放出核酸。

4.使用离心机时,对称放置的离心管必须用天平调平衡。 5.避免剧烈振荡,如研磨过程、搅拌过程等。

九、实验结果误差分析及讨论

经过对本次实验结果进行分析,得出100g猪肝中DNA含量大约为0.1053g的结论,在上网查阅相关资料后发现:猪肝中DNA含量与本次试验实际操作测量得出的结果大致相互吻合。由此可知,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的。

但是本次实验结果只是粗略测量,并未达到精确测量猪肝中DNA的含量,且实验数据较理论值偏低,这是由于某些误差导致,在实验过程中些许因素可能会导致实验结果数据有偏差,经分析得出以下几点:

①在称取猪肝后加入柠檬酸钠缓冲液进行研磨的过程中,由于猪肝组织表面较滑不易磨碎,且研磨至最后依旧有小部分猪肝组织块残留,因此可能导致猪肝中DNA提取不充分,致使实验数据较理论值偏低;

②研磨过程中,可能由于操作不当,导致部分液体溅出,因此可能使得提取液中部分DNA损失,导致实验数据偏低;

③在粗提取DNA操作中,频繁地将DNA提取液转移至各个仪器内,可能有极小部分DNA提取液未倒净,残留在仪器壁上损耗掉,导致实验误差;

④在使用移液枪的过程中,可能因为操作不当或移液枪经常错误使用,出现仪器误差,导致吸取的DNA样液不精确,出现实验误差;

⑤在水相中加入乙醇析出DNA时,不是所有DNA均析出,有小部分依旧融在溶液,导致提取出的DNA含量偏低;

⑥标准曲线制作过程中出现些许误差;

总的来讲,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略地测量出猪肝中DNA的含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法从动物组织中提取DNA的原理与技术,基本达到了本次实验的目的。在今后的实验中会着重注意实验操作的严谨性,严格按照实验前拟定完全的实验步骤进行,保证将实验操作过程中可能出现的误差概率降到最低,尽可能达到预期的实验效果,完成自我的学习及锻炼过程。

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