用，对尿结石的治疗起到临床指导作用。
1试验材料与方法
1.1 试验材料 1.1.1 试验动物
由安徽省实验动物中心提供的的SPF级昆明大鼠18只，雄性，60日龄，体重26.23±1.74g，动物生产许可证号SCXK(皖)2011-002。实验鼠颗粒饲料中钙含量1.43％，磷含量0.87％。大鼠饲养环境温度20~24℃，湿度50~65%，光照12~13h。 1.1.2试剂及药品
氯化铵（NH4Cl），沪试生产，批号：F20050621，分析纯；乙二醇（C2H6O2），国药集团化学试剂有限公司生产，批号：T20110608，分析纯；
金钱草：原料（采回后，切碎，在真空干燥箱中60℃,0.08MPa真空干燥后，置于干燥器中备用）→水提（将粉碎后的称取100g，加入八倍水浸泡，置于超声波清洗器中进行超声提取，抽滤，滤渣再重复过滤两次，收集滤液，再用旋转蒸发仪浓缩至膏状，定容到200ml容量瓶里，置于冰箱中冷藏备用）→浓缩（将定容好的溶液脱水浓缩）→浸膏→喷雾干燥→粉碎 1.1.3 试验饲料
实验鼠颗粒饲料，医药科技有限公司生产。 1.1.4试验仪器和器材
IEICA-RM-2128型切片机，LY-1型展片机；OLYMPUS-CH30显微摄影系统；乙醇、二甲苯、伊红、苏木精等均为国产级，分析纯。 1.2 试验方法 1.2.1 动物分组
实验用昆明大鼠18只，全雄性，60日龄，适应性饲养1w后，按体重相近原则分为对照组、成石组、和金钱草组。每组大鼠各6只，标记并编号。 1.2.2 试验药品配制
成石液：1%氯化铵和1%乙二醇溶液的配制应用电子天平称取氯化铵5g，用10mL规格的量筒量取5mL的乙二醇，同时用500mL的量筒量取500mL的自来水，一并倒入量杯中，并用玻璃棒混匀，倒入药瓶并标记[8]。
金钱草水提取物的制备：原料（采回后，切碎，在真空干燥箱中60℃,0.08MPa真空干燥后，置于干燥器中备用）→水提（将粉碎后的称取100g，加入八倍水浸泡，置于超声波清洗器中进行超声提取，抽滤，滤渣再重复过滤两次，收集滤液，再用旋转蒸发
2
仪浓缩至膏状，定容到200ml容量瓶里，置于冰箱中冷藏备用）→浓缩（将定容好的溶液脱水浓缩）→浸膏→喷雾干燥→粉碎
1.2.3 动物饲养
大鼠饲养在安徽科技学院动物科学学院实验动物房进行，大鼠的饲养管理及饲养环境、用具的清洗、消毒均严格按照标准化操作规范进行。使用刨花作为大鼠垫料，垫料需经过在阳光下晒干，紫外灯照射3~4h，121℃高温蒸汽灭菌20min，60℃干燥箱内鼓风干燥后备用。
成石组和金钱草组大鼠自由饮用配制好的成石液，对照组大鼠自由饮用自来水，都自由采食。环境温度20~24℃，湿度50~65%，光照12~13h，每周定期称重一次。大鼠给药采用灌胃方式，对照组和成石组灌胃生理盐水0.3mL，金钱草组灌胃金钱草水提取液0.3mL相当于0.6g生药，在持续灌胃28天后称重并分别宰杀大鼠。试验过程中认真进行大鼠的一般检查记录大鼠的精神状态、采食、饮水、活动、临床症状、环境温度与湿度及通风等情况。 1.3 样品采集与处理
在4w时，大鼠禁食12h，不禁水过夜，逐只称重，采血后的大鼠立即解剖去左右两侧肾和脾脏，并称重，用滤纸吸去脏器表面血液，去除包膜，称量肾脏和脾脏绝对重量（湿重），并按下式计算肾脏和脾脏的相对重量（肾体比和脾体比）：脏体比量（%）=脏器湿重（g）/宰前活重（g）×100。右肾用4％中性甲醛固定，乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。IEICA-RM-2128型切片机切片5~7μm，HE染色，中性树胶封片，显微镜下对各组织切片进行观察，选取结构典型的切片用OLYMPUS-CH30显微摄影系统拍摄。 1.4 数据统计分析
所有试验数据均采用均数±标准差（M±SD）表示，P＜0.05差异显著，P＜0.01差异极显著。用spss17.0统计软件进行数据分析各数据之间的统计学差异。
2 结果
2.1 宰前活重和肾脏指标的变化
表1 42d各组宰前活重和肾脏指标的变化
组别 对照组 成石组
宰前活重（g） 36.92±2.75 31.97±7.98
肾脏绝对重（g）
0.57±0.09 0.75±0.13a
肾体比（%） 1.55±0.14 2.43±0.58A
3
金钱草组
29.27±2.90
0.56±0.11b
1.95±0.47
注：与正常值比较a表示P<0.05，A表示P<0.01；与成石组比较b表示P<0.05，B表示P<0.01，下同
由表1可以看出，与对照组相比，成石组肾脏绝对重和差异显著（P<0.05）,肾体比差异极显著（P<0.01），成石组的宰前活重与空白组相比有所下降，但差异不显著；金钱草组宰前活重和肾脏绝对重与对照组和成石组相比都有所降低，但金钱草组肾体比要比成石组要低，与对照组比较差异不显著（P>0.05）。金钱草组和枸橼酸钾组与成石组肾脏绝对重相比差异显著（P<0.05）,且枸橼酸钾组与成石组肾体比相比差异显著（P<0.05）。
2.4 各组肾脏切片观察
图1 对照组大鼠肾脏组织切片（HE，100×） 图2 对照组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）
Α
A
B
图3 成石组大鼠肾脏组织切片（HE，100×） 图4 成石组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）
4
C
图5 枸橼酸钾组大鼠肾脏组织切片（HE，100×） 图6 枸橼酸钾组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）
图7 金钱草组大鼠肾脏组织切片（HE，100×） 图8 金钱草组大鼠肾脏组织切片（HE，100×）
D
由上图所示，对照组图1中肾小管排列紧密，细胞分布均匀，图2肾小球细胞核完整，与周围界限明显；成石组图3中大鼠肾脏切片能明显看见肾远曲小管（A）中存在不规则的晶体和规则的四方形晶体（二水合草酸钙）肾小管扩张，管壁破裂细胞核不完整，图4中可见肾小球细胞核破裂，囊肿，肾小管排列疏松，同时可见上皮细胞损伤，变性，脱落。由于尿酸不但可通过干扰尿液中酸性粘多糖(GAGs)的抑制活性引起草酸钙晶体沉积，而且尿酸晶体及尿酸结石碎片可以通过异相成核过程诱导草酸钙形成和生长，因此，尿酸晶体常会与草酸钙晶体互为附生生长，故而影像中可见。成石组图3、4与对照组图1、2比较，成石液对大鼠肾脏有损害作用，肾小球萎缩或囊腔水肿，同时肾小管能清晰可见透明不规则结晶体，成功的诱导成草酸结石大鼠模型。图5、6所示，枸橼酸钾组大鼠肾小管和肾小球内不规则结晶明显减少，但是肾小球仍有一些囊肿（C），肾小管的排列不够紧密。图7、8所示，肾小管排列紧密，但细胞核分布不均匀。肾小球基本恢复正常情况，但有少数肾小球损伤（D）。
3 讨论
研究表明，我国泌尿系结石成分中90%以上都为草酸钙结石[11]。在我国一些地区，由于饲料资源紧缺，养殖场和养殖户用棉副产品饲喂动物，从而使动物易发生尿结石（特别在产棉地区），直接影响了畜牧业的发展和饲料资源的利用。草酸钙结石形成是一个复杂的过程，包括成核、晶体成长、晶体聚集及晶体潴留；多种体内物质都能影响其晶体的形成：低尿pH值低、钠、尿量、钙及尿酸盐可以促进晶体的形成，而许多无机物
5
loading