生物质谱在蛋白质组学研究中应用

1 N蛋白降解片段

2 完整N蛋白 SARS-CoV 攻击Vero E6细胞裂解液蛋白质HPLC

小结

1、利用蛋白质组学策略，从SARS CoV感染的Vero E6细胞提取 液中成功鉴定出S、N及M三个结构蛋白质，其中M蛋白首次 在蛋白质水平鉴定出来；

2、精确测定N 蛋白的相对分子质量，证明其氨基末端的第一 个氨基酸-丝氨酸发生乙酰化修饰，提示不存在理论预测的 磷酸化修饰；

3、通过比较表明两种方法在蛋白质组学研究中各具优缺点， 可根据不同目的选择使用。

胎肝线粒体蛋白质制备

胎肝组织充分清洗后进行匀浆，然后对匀浆液 (2%蔗糖，蛋白质酶抑制剂，2～3g/10ml)进行蔗糖密度梯度离心（120000g, 90min）提取线粒体，最后用裂解液（8M urea, 65mM DTT, 40mM Tris）提取全蛋白质，25000g离心并过滤后，进一步进行整体蛋白质分离。

用

ProteomLab PF 2D色谱仪对胎肝线粒体提取液进行二维色谱分离示意图

对胎肝线粒体全蛋白提取液的一维色谱分离

一

维色谱分离M2B3馏分的反相色谱分离图

色谱条件：反相柱为4.6mm I.d.? 35mm, C18, 1.5μm; 流速为0.5ml/min; 检测波长214nm；溶剂梯度：0～100％B, 60min，100％B保持8min，1.0min回到100％A平衡色谱系统；每管收集2min。

整体蛋白混合物二维色谱分离实验结果：

一维色谱聚焦:40个馏分（0.3pH 或5min）

二维反相色谱:20个馏分（1.0min）

总计:800个馏分。