?
? 使用高盐浓度的酸性溶液可减少部分非特异性吸附
甲酯化修饰对亲和选择性的影响
含酸性
氨基酸残基的肽段，侧链上的羧基也易与金属离子发生静电作用导致非特异性吸附
?
对肽段末端
及酸性氨基酸残基的羧基进行甲酯化修饰，会提高IMAC亲和柱对磷酸肽的亲和选
择性
? 甲酯化反应不能完全进行，一个肽段上修饰不同数目甲基的几种形式会同时存在，分散了肽段的信号强度
? 产生立体异构体，使肽段在反相色谱中的保留也被分裂 ? 甲酯化反应过程会造成样本的损失
? 使用要慎重，与常规方法互补
IMAC-RPHPLC-MSMS自动化分析平台测试结论
? 整个技术平台的工作都可以通过仪器参数设置和样品表的编排来自动完成 ，程序控
制，全程自动化，便于改变条件优化实验参数
? 用标准肽的分析表明该体系对磷酸肽具有一定的选择性亲和富集能力，采用适当的
清洗和洗脱溶液会提高亲和提取效率 ? 对肽段的酸性氨基酸残基的羧基进行甲酯化修饰，会提高IMAC亲和柱对磷酸肽的
亲和选择性，但可能会造成信号分散和样本损失 建立了磁性纳米材料制备、选择性富集结合生物质谱分析磷酸肽新方法
方法特点：
? 修饰过程简单、快速;
? 无样品损失、高灵敏度；
? 可处理飞摩尔-皮摩尔的样品;
? 高通量。
应用：磁性纳米材料制备、选择性富集结合生物质谱分析磷酸肽新方法已经用于鼠肝质膜的磷酸化蛋白质组分析。
相关工作已经在RCM 和JPR上发表。
生物素酰肼标记-亲和素纯化富集方法的建立及在肝癌细胞膜糖蛋白研究中的应用
生物素法富集膜糖蛋白流程图
三个富集技术路线
①：肽段水平富集；②：蛋白水平富集；③：两次富集(蛋白/肽段) (3000cutoff：3000Da超滤) 质谱图显示糖肽富集效果 富集前
富集后
三条富集技术路线结果
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