操作方法 进样2μL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中,可测得不同浓度山梨酸、苯甲酸的峰高,以浓度为横坐标,相应的峰高值为纵坐标,绘制标准曲线。同时进样2μL样品溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。 结果计算
X=(m1*1000)/m2*(5/25)*(V2/V1)*1000 (g/kg或g/L)
式中X为样品中苯甲酸或山梨酸的含量,g/kg;m1为测定样品液中苯甲酸或山梨酸的质量,μg;m2为样品的质量,g;V1为加入丙酮的体积,mL;V2为测定时进样的体积,mL。
2.7产品微生物检测
(1)金黄色葡萄球菌检测方法:
方法:金黄色葡萄球菌 Baird-Parker平板计数。
依据:GB 4789.10—2010(食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验)。 原理:连续的适宜稀释度的样品匀液,接种Baird-Parker平板后,平板计数及血浆凝固酶试验,对金黄色葡萄球菌进行定性定量检测。
样品处理:称取25 g 样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 -10000 r/min 均质1 -2 min,或置盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1-2 min,制成1:10 的样品匀液。用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1 支1 m L 无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液。
试剂仪器:10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、7.5 %氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker琼脂平板、脑心浸出液肉汤等。
检验流程:制备2-3个连续的10倍适宜稀释度的样品匀液,接种Baird-Parker平板后36℃,42?2h后,进行平板计数及血浆凝固酶试验,结果阳性即检出金黄色葡萄球菌。
结果处理:对金黄色葡萄球菌进行定性定量检测后,按下式计算:
T——样品中金黄色葡萄球菌菌落数; A——某一稀释度典型菌落的总数; B——某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数; C ——某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数; d ——稀释因子。
根据Baird-Parker平板上金黄色葡萄球菌的典型菌落数,按公式计算,报告每g (或mL)样品中金色葡萄球菌数,以CFU/g (或mL) 表示;如T值为0,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。
(2)大肠杆菌菌落数检测方法:
方法:大肠菌群MPN(most probable number)计数法。
依据:GB 4789.3-2010(食品微生物学检验 大肠菌群计数)。
原理:大肠杆菌在样本内的分布是随机的,所以检测细菌时,可按概率理论计算菌
数。如果每份接种样的细菌数平均值为,每个接种管中进入k (k=0、1、2……)个菌的概率Pn接近于泊松分布。
样品处理:称取25 g 样品,放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000-10000 r/min 均质1-2 min, 或放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1-2 min,制成1:10 的样品匀液。用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中。
试剂:牛肉膏蛋白胨培养基、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(BGLB)、结晶紫中性红胆盐琼脂、生化试剂盒等。
检验流程:制取3个连续10倍样品梯度稀释液,接种肉汤管,42h后将产气再接种BGLB肉汤,42h后,仍然产气的为大肠杆菌,选取试样进行MPN计数。 结果处理:确证的大肠菌群阳性管数,检索MPN表,报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。详见GB 4789.3—2010大肠菌群最可能数(MPN)检索表
(3) 乳酸菌的检测 3.1方法:平板计数法
3.2依据:GB 4789.35—2010 3.3操作步骤:
3.3.1样品制备:液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分振摇,制成1:10 的样品匀液。 3.3.2步骤:
1. 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中(注意吸管尖端不要触及稀释液),振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液。
2. 另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头,按上述操作顺序,做10 倍递增样品匀液,每递增稀释一次,即换用1 次1mL灭菌吸管或吸头。 3.乳酸菌计数 3.4乳酸菌总数
根据待检样品活菌总数的估计,选择2个~3个连续的适宜稀释度,每个稀释度吸取0.1mL 样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板,使用 L 形棒进行表面涂布。36℃±1℃,厌氧培养48h±2 h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min 内完成。 3.5双歧杆菌计数
根据对待检样品双歧杆菌含量的估计,选择2个~3个连续的适宜稀释度,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐(Li-Mupirocin)改良MRS 琼脂平板,使用灭菌L 形棒进行表面涂布,每个稀释度作两个平板。36℃±1℃,厌氧培养 48 h±2 h 后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15 min 内完成。 3.6嗜热链球菌计数
根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计,选择2个~3个连续的适宜稀释度,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于 2个MC 琼脂平板,使用 L 形棒进行表面涂布。36℃±1℃,需氧培养 48 h±2 h后计数。嗜热链球菌在MC 琼脂平板上的菌落特征为:菌落中等偏小,边缘整齐光滑的红色菌落,直径2 mm±1mm,菌落背面为粉红色。从样品稀释到平板涂布要求在15 min 内完成。
3.7乳杆菌计数
乳酸菌总数结果减去双歧杆菌与嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。 3.8菌落计数
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units,CFU)表示。 3.8.1选取菌落数在30 CFU~300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数,大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
3.8.2其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
3.8.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
2.8产品中重金属检测
(1)总砷残留含量检测方法:
方法:原子原子吸收分光光度法。
依据:GB/T 5009.11-2003(食品中总砷的测定)。
原理:无机砷以氯化物的形式被提取,经碘化钾、氯化亚锡还原为三价砷,然后与锌粒和酸产生的新生态氢生成砷化氢,经银盐溶液吸收后,形成红色胶态物,与标准系列比较定量。
样品处理:称取1.00g~10.00g试样,加入少量盐酸溶液(1+1),在研钵中研磨成糊状,用30 mL 盐酸溶液(1+1)分次转入100 mL 具塞锥形瓶中,置70℃ 水浴1h,取出冷却后,用脱脂棉或单层纱布过滤,用20mL~30mL水洗涤锥形瓶及滤渣,合并滤液于测砷锥形瓶中,使总体积约为50mL左右。
分析条件:光电倍增管负高压:240 V,汞空心阴极灯电流:30 mA,原子化器:温度300℃,载气流速500 mL/min,读数延迟时间:1.0 s,读数时间10. 0s,屏蔽气1000mL/min,测量方式:标准曲线法,读数方式:峰面积归依法,硼氢化钾溶液加液时间8.0s。
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