胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，易溶于酒精、乙醚和氯仿等有机溶剂，故常用有机溶剂萃取胡萝卜素，实验流程为：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取（石油醚）→过滤→浓缩→胡萝卜素→鉴定（纸层析法）。
【详解】（1）从岩藻中提取β一胡萝卜素常用萃取法，在加热瓶口安装冷凝回流装置的目的是防止加热时有机溶剂挥发，提取的β一胡萝卜素粗品可通过纸层析进行鉴定。
（2）利用红酵母菌发酵生产β一胡萝卜素时，首先要对操作仪器进行无菌处理，其中对培养皿进行干热灭菌。培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右才能倒平板，估计培养基温度的方法是触摸锥形瓶不烫手。 （3）常采用稀释涂布平板法进行微生物的分离和计数，这种操作的核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。通过观察菌落的形状、大小、颜色隆起程度等特征对微生物进行鉴定。
【点睛】本题主要考提取胡萝卜素的方法和微生物的分离及计数相关知识，意在考查学生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力。
12.蓝藻兼具微生物和植物的优点，是一种独特的基因工程受体系统。很多蓝藻含有质粒，但其质粒不能直接作为运载体，需要构建成穿梭质粒表达载体，才能使目的基因在蓝藻中有效的复制和表达。回答下列问题：
(1)据图1推测，与普通基因表达载体相比，穿梭质粒表达载体既能在___________中复制，也能在___________中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载体的蓝藻，应在选择性培养基中添加___________。 (2)若大肠杆菌作为受体细胞时，应选用___________处理使其成为感受态细胞。采用基因枪法将目的基因导人蓝藻前，可使用___________(填“纤维素酶和果胶酶”或“溶菌酶”或“胶原蛋白酶”)去除蓝藻的细胞壁。
(3)已知DNA复制时，子链的延伸方向是5′→3′。使用PCR技术检测转基因蓝藻中是否存在人胸腺素基因可选择图2中1、2、3、4四种单链DNA片段中的___________作为引物，此过程还需要___________酶。 【答案】 (1). 大肠杆菌 (2). 蓝藻 (3). 卡那霉素 (4). Ca (5). 溶菌酶 (6). 2和3 (7). 热稳定DNA聚合酶(或Taq酶) 【解析】 【分析】
据图分析，图1为构建成的穿梭质粒表达载体，其中含有大肠杆菌质粒复制原点、蓝藻质粒复制起点、启动子、终止子、卡那霉素抗性基因等结构，图2为人胸腺素基因；植物细胞壁的成分是纤维素和果胶，纤
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维素酶和果胶酶用于去除植物细胞壁，胶原蛋白酶用于动物细胞培养中使细胞分散开，据此分析。 【详解】（1）据图1推测，与普通基因表达载体相比，穿梭质粒表达载体既能在大肠杆菌中复制，也能在蓝藻中复制。为了筛选转入了穿梭质粒表达载体的蓝藻，应在选择性培养基中添加卡那霉素。
（2）若大肠杆菌作为受体细胞时，应选用CaCl2处理使其成为感受态细胞。采用基因枪法将目的基因导人蓝藻前，要去掉其细胞壁，纤维素酶和果胶酶用于去除植物细胞壁，胶原蛋白酶用于动物细胞培养中使细胞分散开，因此去除蓝藻的细胞壁可用溶菌酶。
（3）据图2分析，由于DNA复制时，子链的延伸方向是5′→3′，因此设计引物时应选择2、3，PCR还需要热稳定的DNA聚合酶(或Taq酶)。
【点睛】本题考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题和解决问题的能力，解题时需注意PCR中引物设计的要求。
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