FDA沙门氏菌检验标准中文版（一）

质的漏斗（用带卷好以便高压灭菌）将样液25ml慢慢注入灭菌的500ml的含225ml的普通肉汤的锥形瓶中或其他适宜的容器内，使其覆盖在普通肉汤的表面，也可多个25g检测单位混合倒入含有相应比例普通肉汤的容器内，使样品覆盖在普通肉汤的表面，将样品容器室温静置60±5min，旋松塞子，不需混匀和调整PH，35℃培养24±2h，按D1-11继续。

b、 凝乳酪。无菌称取25g样品于无菌的250ml烧杯或其他适宜的容器内，用灭菌的玻璃或纸质的漏斗（用带卷好以便高压灭菌）将样液25ml慢慢注入灭菌的500ml的含225ml的乳糖肉汤的锥形瓶中或其他适宜的容器内，使其覆盖在乳糖肉汤的表面，也可多个25g检测单位混合倒入含有相应比例乳糖肉汤的容器内，使样品覆盖在乳糖肉汤的表面，将样品容器室温静置60±5min，旋松塞子，不需混匀和调整PH，35℃培养24±2h，按D1-11继续。 c、 咸乳酪。无菌称取25g样品于无菌的带螺旋帽的广口瓶中或其他合适的容器内，添加225ml无菌的乳糖肉汤并且混匀，多个25g样品检测单位可以混合，旋紧瓶塞，室温下静置60±5min，然后摇匀，用PH试纸检测PH，如果必要调PH值至6.8±0.2。把瓶盖松开约1/4圈，置于35℃培养24±2h。以下试验接D,1-11进行。

6、豆粉。按上述凝乳酪和咸乳酪的方法进行检测，但多个25g样品不能混合。

7、含蛋制品(面条、蛋卷、空心粉、意大利面条)、干酪、面团、调制色拉(火腿、蛋、鸡肉、金枪鱼、火鸡)、新鲜的、冷冻的或干的水果和蔬菜、果仁和甲壳类动物(小虾、蟹、小龙虾、大虾、大龙虾)和鱼。

检测前最好不要解冻，如检测样品必须解冻，需在45℃以下进行，置于能自动控温的水浴锅内，不断搅拌15分钟或在2-5℃解冻18小时。

无菌称取25克样品，放入无菌的均质器内。加入225ml无菌的乳糖肉汤均质2 分钟。再无菌转移均质混合物于无菌的广口的带有旋螺帽的锥型瓶或其它合适的容器中，盖紧瓶盖，室温静置60±5min。振荡混匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1N NaOH或1N HCl调PH值至6.8±0.2。把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。以下试验按D,1-11进行。

8、干酵母(活性和无活性酵母)

无菌称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500ml)或其它合适的容器内，加 入225ml灭菌的胰酪胨大豆肉汤，充分混匀形成悬液，盖紧瓶塞，室温下静置60min。摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1N NaOH或1N HCl调PH值至6.8±0.2。把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。以下试验按D,1-11进行。 9、冷冻和高级混合食品

无菌称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500ml)或其它合适的容器内，加 入225ml灭菌的营养肉汤，充分混匀形成悬液，盖紧瓶塞，室温下静置60min。摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1N NaOH或1N HCl调PH值至6.8±0.2。把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。以下试验按D,1-11进行。 10、调料

a、 黑胡椒、白胡椒、芹菜种子或芹菜叶片、干辣椒粉、红辣椒、茴香、皱叶欧芹片、迷迭香、芝麻、百里香和蔬菜片。无菌称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500ml)或其它合适的容器内，加 入225ml灭菌的TSB肉汤，充分混匀形成悬液，盖紧瓶塞，室温下静置60min。摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1N NaOH或1N HCl调PH值至6.8±0.2。把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。以下试验按D,1-11进行。

b、 洋葱片、洋葱粉和大蒜片。无菌称取25g样品于灭菌的带螺旋帽的广口瓶或其它合适的容器内，样品的前增菌培养基用含K2SO4的TSB肉汤(1000mlTSB肉汤中加入5g K2SO4，最终浓度为0.5%)，将K2SO4加入TSB肉汤中，分装每瓶225ml，121℃高压灭菌15min，灭菌后，无菌测定其容量。如果必须，调整容量至225ml，将225ml含有K2SO4的TSB加

入样品中混匀，以下按C-10a进行。

c、 多香果粉、肉桂、丁香及薄荷调味料

目前还没有方法可以中和这4种调料的毒性。将它们稀释至无毒的程度后，再进行检测。检测多香果粉、肉桂和薄荷时，样品与肉汤的比例为1:100，而丁香与肉汤的比例为1:1000；检验叶状调味品时，由于是脱水产品，可吸收部分肉汤，在实际检测中样品与肉汤的比例大于1:10，检测这些调味品时，按以上C-10a进行，保持推荐的样品与肉汤的比例。 11、密饯和糖衣(包括巧克力)

无菌操作称取25g样品于灭菌的搅拌器内，加入225ml重溶的脱脂奶粉，搅拌2分钟，再无菌操作移取样品液到灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500ml)或其它合适的容器内，盖紧瓶塞，室温下静置60±5min。摇匀，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1N NaOH或1N HCl调PH值至6.8±0.2。加入0.45ml1%亮绿水溶液，混匀，把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。以下试验按D,1-11进行。 12、椰子

无菌操作称取25g样品于灭菌带螺旋帽的广口瓶中(500ml)或其它合适的容器内，盖紧瓶塞，室温下静置60±5min。摇匀的搅拌器内，加入225ml乳糖肉汤，搅拌2分钟，再无菌操作移取样品液到，用PH试纸测PH值，如果需纠正PH值，用无菌1N NaOH或1N HCl调PH值至6.8±0.2。加入2.25ml已蒸过的Tergitol-7溶液，混匀。也可用已蒸过的Triton-100。这些表面活性剂要使用最少的量，刚好产生气泡。Triton-100滴上2-3小滴即可。把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。以下试验按D,1-11进行。 13、食品染料和食品色素

PH值6.0或以上的染料(10%的水悬浮液)，按上述干全蛋方法(以上C-1法)进行检测。沉淀染料或PH值低于6.0的染料，无菌操作称取25g样品，放入灭菌的带螺旋帽的500ml广口瓶内，加入225ml不含煌绿的TTB肉汤混匀，盖紧瓶塞，室温下静止60±5min。用PH计调整PH值至6.8±0.2，加入2.25ml 1%的煌绿溶液，摇匀，把瓶盖松开约1/4圈置于35℃培养24±2h。以下试验按D,3-11进行。 14、明胶

无菌操作称取25g样品，放入灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他合适的容器内。加入225mL灭菌的乳糖肉汤和5mL5%明胶酶水溶液。混合均匀，盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。转动混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。将瓶盖旋松1/4转，置35℃培养24±2小时。以下试验按D,1-11进行。

15、肉、肉代用品、肉副产品、动物产品、腺体制品和粗粉（鱼，肉，骨）

无菌操作称取25g样品放入灭菌的搅拌器中。加入225mL灭菌的乳糖肉汤，搅拌2分钟。再无菌操作转移已搅拌的混合物到灭菌的带螺旋帽的500mL广口瓶中或其他合适的容器内。盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。如果混合物为粉状，研磨过或已粉碎的，则不用搅拌。不需要搅拌的样品，加入乳糖肉汤，并充分混匀；盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。旋动使充分混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。总计加入2.25mL已蒸过（15分钟）的Tergitol-7，混匀。也可用已蒸过（15分钟）的Triton-100来代替。控制使用这些表面活性剂剂量，刚刚起泡沫即可。实际用量取决于试验材料的成分；分析粉状腺体制品，不需要用表面活性剂。将瓶盖旋松1/4转后，将样品混合物置35℃培养24±2小时。以下试验按D,1-11进行。

16、田鸡腿（此方法用于国内的和国外的所有田鸡腿检验） 将15对田鸡腿放入灭菌塑料袋内，并用灭菌乳糖肉汤浸没，其比例样品比乳糖肉汤为1:9(见以上A，23-24)。如果单个腿估计平均重在25g或以上，则只需检查15对的每对中的一条腿。把袋放入大塑料烧杯内或其它合适的容器中，在机械荡器上震荡15min，以4cm（1-1/2in）

机械振荡100次/分钟。从袋中倾倒出乳糖肉汤于另一个灭菌塑料袋内。加更多的乳糖肉汤，使总量为3500mL。充分混匀，于室温下静置60分钟。必要时调节pH值至6.8±0.2。再把装有乳糖肉汤的塑料袋放入塑料烧杯或其它合适的容器内，于35℃培养24±2小时。接下去按下面的D，1-11进行。

17、野兔骨架（此方法用于国内的和国外的所有的野兔骨架）

取3只野兔骨架放入灭菌塑料袋内，并用灭菌乳糖肉汤浸没，其比例：样品比乳糖肉汤为1:9(见上述A，23-24)，把袋放入大塑料烧杯内或其它合适的容器中，在机械震荡器上以4cm（1-1/2in）幅度振荡100次/分钟，震荡15min。从袋中倾倒出乳糖肉汤混合物于另一个灭菌塑料袋内，加更多的乳糖肉汤，使总量为3500mL。充分混匀，于室温静置60分钟。必要时用pH试纸调置6.8±0.2，于35℃培养24±2小时。接下去按下面D，1-11进行。 18、口香糖

无菌操作称取25g样品到灭菌烧杯（250mL）或其他合适容器中。制备过滤除菌的1.0%纤维素酶溶液（加1g纤维素酶到99mL无菌水中），用0.45um膜过滤除菌，置于150mL瓶中。（纤维素酶溶液在2-5℃可保存最长2周时间）。加入225mL无菌乳糖肉汤和2.25mL无菌1%纤维素酶溶液于500mL无菌带螺旋盖的广口瓶或其他合适容器。用磁力搅拌器剧烈搅拌酶/肉汤混合物时，通过无菌玻璃漏斗迅速倒入25g待检样品。旋好瓶盖，室温下静置60分钟，无须调pH值。旋松瓶盖，35℃培养24±2小时。以下按D，1-11进行。 19、桔子汁、苹果汁(经巴氏消毒或未经巴氏消毒)和果酒(经巴氏消毒)

无菌称取25ml样品加入到含有225mlUPB肉汤中，放入灭菌的带螺旋帽的500ml广口瓶内或其它合适的容器内，盖紧瓶塞，充分摇匀，室温下静止60±5min。不用调PH值，旋松瓶盖，35℃培养24±2小时。以下按D，1-11进行(按低含量微生物进行处理)。 20、猪耳和狗颚类

从每个样品中挑出一片(尺寸小的可挑2-3片)置于无菌的塑料袋中，将塑料袋置于大烧杯中或其它合适的容器内，按1:9的比例(g/L) (见以上A，23-24)加入无菌的乳糖肉汤，浸没样品。盖紧瓶盖在室温下静置60分钟。旋动使充分混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2。加入0-1%已蒸过（15分钟）的Tergitol-7或已蒸过（15分钟）的Triton-100来代替。控制使用这些表面活性剂剂量，刚刚起泡沫即可。例如，225ml乳糖肉汤加入最大体积为2.25ml。将样品混合物置35℃培养24±2小时。接下来的试验按D,1-11进行。 D、沙门氏菌的分离培养

1、 拧紧瓶盖并轻轻振荡培养过的样品混合物。

口香糖：吸取1ml样品液到10ml的SC肉汤中，另取1ml样品液到10ml TTB肉汤中，混匀。

所有其它食品：吸取0.1ml样品液到10ml的RV培养基中，另取0.1ml样品液到10mlTTB肉汤中，混匀。

2、 选择性增菌按如下步骤进行： 含菌量高的食品：RV培养基在42±0.2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。TTB肉汤在43±0.2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。 含菌量低的食品(口香糖除外)：RV培养基在42±0.2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。TTB肉汤在35±2℃（水浴、循环的、温度可调）中培养24±2小时。 口香糖：SC和TTB肉汤在35℃培养24±2小时。 3、 混合均匀（如果是试管，涡旋式混合），用3mm直径的接种环，满环（10μl）划线接种TTB肉汤于亚硫酸铋（BS）琼脂，XLD琼脂和HE琼脂平板上。BS琼脂平板于划线接种的前一天制备好储存在室温暗处。

4、 再用3mm直径的接种环，从RV培养基（样品为含菌量高的食品和菌量高的食品）和

SC肉汤（样品为口香糖）取满环（10μl），划线接种于上述平板上。

5、 参考官方检测方法994.04，对于冷藏食品的前增菌和低水份食品的选择性增菌(仅SC和TTB肉汤)方法。这样样品的检测最迟可从星期四开始，周末不用加班工作。 6、 把选择性平板置35℃培养24±2小时。 7、 检查平板中可疑沙门氏菌菌落的存在。

FDA沙门氏菌检验标准中文版（二） 典型的沙门氏菌菌落形态： 从每个经过24±2小时培养后选择性平板上挑取2个或更多个菌落。典型的 沙门氏菌菌落如下：

a、 在HEKTOEN氏肠道菌（HE）琼脂上。菌落呈兰绿至兰色，带或不带黑色中心。许多沙门氏菌培养物可呈现大的光泽黑色中心或几乎全部黑色的菌落。

b、 在木糖赖氨酸去氧胆酸盐（XLD）琼脂上. 粉色菌落，带或不带黑色中心。许多沙门氏菌培养物可有大的光泽黑色中心或呈几乎全部黑色的菌落。

c、 亚硫酸铋（BS）琼脂上。呈褐色，灰色或黑色，有时带有金属光泽。菌落周围的培养基通常开始呈褐色，但伴随培养时间的延长而变为黑色，并有所谓的晕环效应。 如果典型菌落出现在经24±2小时培养后的BS琼脂上，则挑取2个或更多个典型菌落。不论BS琼脂平板在培养24±2小时时是否挑取过菌落，BS平板再培养24±2小时。培养了48±2小时后，如果BS平板上出现典型菌，则挑取2个或更多个菌落，如果只在经过24±2小时培养的BS平板上挑取了菌落，接种到三糖铁琼脂（TSI）和赖氨酸琼脂（LIA）上，会呈现非典型反应以至视为培养物中不存在沙门氏菌 。参见下面D.8部分和D.9部分，有关TSI和LIA反应的详细描述。 非典型的沙门氏菌菌落形态:

不存在典型的或可疑的沙门氏菌菌落时，按如下步骤检验非典型的沙门氏菌菌落。

a. HE和XLD琼脂. 非典型的沙门氏菌在HE和XLD琼脂上呈黄色菌落，带或不带黑色中心。HE和XLD平板经24±2小时培养后，没有典型的沙门氏菌菌落，则挑取2个或更多个非典型的沙门氏菌菌落。

b. BS琼脂.某些非典型菌株产生绿色菌落，其周围培养基稍微或不呈暗色。如果BS平板培养24±2小时后，没有出现典型菌落，则不挑取任何菌落，让平板继续培养24±2小时。如果经48±2小时培养后，仍没有典型或可疑的菌落出现，则挑取2个或更多个非典型的菌落。 参考的对照培养物

除了阳性对照外（典型沙门氏菌），3个附加的沙门氏菌培养物也可用来辅助非典型沙门氏菌在选择性平板上的获得，这些对照是乳糖阳性，H2S阳性的沙门氏菌（ATCC12325）和乳糖阴性，H2S阴性的沙门氏菌（ATCC9842），或者乳糖阳性，H2S阴性的沙门氏菌（ATCC29934），这些菌种可从ATCC购买到。

8、 用灭菌接种针轻轻地接触每个菌落中心部位，接种TSI斜面，先在斜面上划线，再于底层穿刺。不需灼烧接种针，即可接种LIA斜面，先穿刺接种底层两次，再划线斜面上。由于赖氨酸脱羧反应需严格厌氧条件，因而LIA斜面必须有深的底层（4cm）。将已挑过菌落的选择性平板于5-8℃储存。 9、 将TSI和LIA琼脂斜面于35℃分别培养24±2小时。当进行斜面培养时放松试管帽以保持需氧条件，以防止过量的H2S产生。在TSI琼脂中，典型的沙门氏菌培养物使斜面呈碱性（红色），底层呈酸性（黄色），产生或不产生H2S（琼脂变黑色）。在LIA琼脂中，典型的沙门氏菌培养物其试管底层呈碱性（紫色）反应。只有试管底层呈明显黄色时才认为有酸