FDA沙门氏菌检验标准中文版（一）

性（阴性）反应。不要单纯根据其试管底层产生的褪色反应就排除它。在LIA中，大多数沙门氏菌培养物皆产生H2S；一些非沙门氏菌培养物产生砖红色反应。

10、 在LIA琼脂上所有底层呈碱性反应的培养物，无论其在TSI琼脂上反应如何，皆应全部保留为可疑的沙门氏菌分离物，并进一步做生化和血清学试验。在LIA中呈酸性底层反应和在TSI中呈斜面碱性，底层酸性的培养物，均视为可疑的沙门氏菌分离物，应进一步做生化和血清学试验。在LIA中呈酸性底层和在TSI中呈酸性斜面和酸性底层的培养物，可视为非沙门氏菌培养物而弃去。对所保留的拟定阳性TIS琼脂培养物，可按下面四，11节叙述的进行检测，是否为沙门氏菌，包括亚利桑那沙门氏菌。如果TSI中培养物没有呈现沙门氏菌的典型反应（斜面碱性，底层酸性），再从未拟定阳性的选择性平板上另外挑取可疑菌落，象上面四，8节所述的接种TSI和LIA斜面。 11、 生化和血清学鉴定试验： a. 从RV培养基（或口香糖中亚硒酸盐胱氨酸肉汤）划线分离的选择性琼脂平板上所挑取的3个拟定阳性TSI琼脂培养物和从四硫磺酸盐肉汤划线分离的选择性平板所挑取的3个拟定阳性TSI琼脂培养物，进行生化和血清学鉴定试验。

b. 如从一组选择性琼脂平板未分离出3个拟定阳性的TSI琼脂培养物，则对其它已分离到的拟定阳性的TSI琼脂培养物进行生化和血清学鉴定试验。对所分析的每个25g样品，至少应检查6个TSI培养物。 E、沙门氏菌的鉴定：

1、 混杂培养物. 对呈混杂菌的TSI琼脂培养物，皆应划线接种于麦康凯（MC）琼脂，HE琼脂，或木糖赖氨酸去氧胆酸盐（XLD）琼脂上，于35℃培养24±2小时。检查平板上可疑沙门氏菌存在与否。

a. 在麦康凯（MC）琼脂上：典型菌落呈透明、无色，有时带有暗色中心。沙门氏菌菌落有时可使培养基中其它细菌所造成的胆盐沉淀区透明。 b. 在HE琼脂上：见上述四，7a

c. 在木糖赖氨酸去氧胆酸盐（XLD）琼脂上：见上述四，7b. 按上面的四，7节所述转种至少2个可疑沙门氏菌菌落到TSI琼脂和LIA琼脂斜面上，接下去按上述的四，9节进行鉴定. 2、 纯培养物：

a、 尿素酶试验（常规）。由每个拟定阳性TSI琼脂斜面培养物，用灭菌针分别接种生长物到每个尿素肉汤试管中。偶尔也会有未接种的尿素肉汤管变紫红色（试验阳性），因而应包括未接种该肉汤管作为对照，于35℃培养24±2小时。 b、 可选的尿素酶试验（快速法）。用3mm直径接种环，自每一拟定阳性的TSI琼脂斜面培养物中取2环转种到快速尿素肉汤管中，37±0.5℃水浴中培养2小时。弃去所有呈阳性结果的培养物，保留所有阴性反应的（培养基不变色）培养物，为进一步研究试验用。 3、 血清学多价鞭毛（H）试验：

a、 此时或以后进行多价鞭毛（H）试验，可按下面五，4节所述进行。从每个尿素酶阴性的TSI琼脂斜面培养物接种到以下任一项， 1）脑心浸液肉汤，于35℃培养4�6小时，直到可见的生长物出现（供当日试验用），或2）胰胳胨大豆肉汤，于35℃培养24±2小时（供次日试验用）。在各5mL肉汤培养物中加2.5mL甲醛生理盐水溶液。

b、 选两个以甲醛处理的肉汤培养物同沙门氏菌多价鞭毛（H）抗血清试验。在10×75mm或13×100mm血清学试管内，加入0.5mL经合适稀释的沙门氏菌多价鞭毛（H）抗血清，再加入0.5mL待测抗原进行试验。并以0.5mL甲醛生理盐水溶液同0.5mL甲醛处理的抗原混合好，制成盐水对照，将各混合物于48-50℃水浴培养，每隔15分钟观察一次初步结果，并于1小时读数最终结果。 阳性反应：在甲醛肉汤培养物与血清混合物中凝集，而在甲醛肉汤培养物与甲醛盐水管中（对

照管）不凝集。 阴性反应：在甲醛肉汤培养物与血清混合物中（试验混合物）不凝集，在对照管中也不凝集。 非特异反应：在试验混合物与对照管中皆出现凝集。对出现这类结果的培养物，需用“Spicer Edwards”氏抗血清做进一步试验。 4、 Spicer-Edwards血清试验

用这个实验可代替多价H血清试验，也可用来对于多价H血清反应不明显的培养物的进一步的实验。如E、3b所述，进行Spicer-Edwards抗原实验，当结果是H血清阳性时，需按E、5a-c进行生化实验；如果两个经过甲醛处理的培养物是阴性的，按E、3a得到的四个额外的培养物进行血清学实验，如果可能，获得两个阳性培养物，按E、3a进行附加的生化实验，如果所有的来自于样品的尿素酶阴性反应的TSI培养物的H血清实验是阴性的，按E、5a-c进行附加的生化实验。

5、 尿素酶阴性培养物试验.

a、 赖氨酸脱羧酶肉汤。如果所做的LIA试验是满意的，则不需重复试验。如果培养物呈现可疑的LIA反应，则以赖氨酸脱羧酶肉汤进行赖氨酸脱羧酶的最终鉴定。将少量可疑沙门氏菌阳性TSI琼脂斜面培养物接种至赖氨酸脱羧酶肉汤管。将试管帽旋紧，置于35℃培养48±2小时，至少每隔24小时检查一次。沙门氏菌因碱性反应，则使整个培养基呈紫色。阴性反应则使整个培养基呈黄色。如果培养基出现褪色现象（即不呈紫色也不呈黄色），可加入几滴0.2%溴甲酚紫溶液，然后再观察试管的反应。

b、 酚红卫茅醇肉汤或含有0.5%卫茅醇的紫色肉汤基础液。由TSI琼脂上取少量培养物接种至肉汤管中。将试管帽放松。置于35℃培养48±2小时，但24h后观察反应。大多数沙门氏菌呈阳性实验结果，表现为内部发酵管中产气和培养基变酸（黄色）。产酸为阳性反应。阴性反应为倒管内无气体产生。整个培养基呈红色（有酚红指示剂）或紫色（有溴甲酚紫指示剂）。

c、 胰蛋白胨（或色氨酸）肉汤。将少量TSI琼脂培养物接种到肉汤管中，置35℃培养24±2小时，并按以下进行试验。

1) 氰化钾（KCN）肉汤。从24h色氨酸培养物移取3mm接种环一环转种到KCN肉汤管中。将管口加热，以便加塞时蜡封良好。35℃培养48±2小时，但24h后观察反应。有生长者（有浑浊）为阳性。大多数沙门氏菌在此培养基中不能生长，即无浑浊现象。

2) 丙二酸盐肉汤。用3mm接种环移取24h色氨酸肉汤培养物，转种到丙二酸盐肉汤管中。因偶尔会出现未接种的丙二酸盐肉汤在存放期间变兰（阳性反应），所以应有未接种的丙二酸盐肉汤管作对照。35℃培养48±2小时，但在培养24h后观察反应。大多数沙门氏菌培养物在此肉汤中为阴性反应（绿色或不变色）。

3) 吲哚试验。转种5mL24h色氨酸肉汤培养物到空试管中，加入0.2-0.3mLKovacs氏试剂，大多数沙门氏菌培养物为阴性反应（在肉汤表面无深红色）。并记录呈桔色和粉色变化的中间型为±反应。

4) 沙门氏菌血清学鞭毛（H）试验。如果未做多价鞭毛（H）试验或Spicer-Edwards氏鞭毛（H）试验，可任选其一。

5) 吲哚试验阳性和血清学鞭毛（H）试验阴性；或者KCN试验阳性和赖氨酸脱羧酶试验阴性的非沙门氏菌任一培养物予以去除。 6、 沙门氏菌血清学菌体（O）试验。

（用已知沙门氏菌培养物同所有抗血清做予试验）。 a、 多价菌体（O）试验：用蜡笔在每个玻璃或塑料平板（15×100mm）内侧划出2个约1×2cm的区域。可使用商品化的分区载玻片，用2mL0.85%生理盐水乳化从24-48hTSI斜面或者更好是胰胨血琼脂基础（无血），用3mm接种环移取培养物。加1滴菌悬液于用蜡笔标出的

每一矩形区域的上部。这一区域的下部加1滴生理盐水。在另一区域加1滴沙门氏菌多价菌体（O）抗血清。再以干净灭菌的接种环或针将一个区域内的菌悬液和生理盐水混合。在另一区域内菌悬液和抗血清液混合。将混合液前后倾斜移动1min，并在良好照明下对着黑暗背景观察，任何程度的凝集都视为阳性反应。多价菌体（O）试验结果分类如下： 阳性反应：混合物试验凝集，而在盐水对照中不凝集。 阴性反应：混合物试验不凝集，在盐水对照中也不凝集。

非特异性反应：混合物试验和盐水对照中皆凝集，需按Edwards和Ewing氏的肠杆菌科鉴定中所描述的进一步作生化学和血清学试验。

b、 菌体(O)群试验. 如有各群菌体（O）抗血清，包括Vi，代替沙门氏菌多价菌体（O）抗血清，按上述五，5a试验。对Vi凝集反应阳性的可参照官方分析分析方法的967.28B部分专门处理这些培养物。与菌体（O）群抗血清呈阳性凝集的培养物，作该菌体（O）群阳性记录；不能与菌体（O）群抗血清发生反应者，做该菌体（O）群试验阴性记录。

7、补充生化试验. 按表1中1-11项试验，对培养物呈典型沙门氏菌反应者，进行沙门氏菌分类。如在25g分析样品中有一个TSI培养物被划为沙门氏菌，则该25g分析样品的其他TSI培养物就无需进一步试验。沙门氏菌鞭毛（H）试验阳性表明有沙门氏菌抗原，但不具有沙门氏菌生化特性者，应对培养物作纯分离（按上述五、1），按上述五、2开始重新做试验。

对表1中1-11项目，不呈典型沙门氏菌反应的培养物做以下补充试验以最终判断为非沙门氏菌。

a、 酚红乳糖肉汤或紫色乳糖肉汤。

1) 从每个尚未分类的24-48hTSI琼脂斜面上挑取少许培养物，接种到肉汤管中，35℃培养48±2h。并在24h后开始观察变化。

阳性反应：产酸（黄色）和在倒立发酵管内产气。只要产酸就视为阳性反应。大多数沙门氏菌为阴性结果。即在倒立发酵管内没有气体形成，和整个培养基呈红色（含酚红指示剂）或紫色（含溴甲酚紫指示剂）。

2) 除培养物在TSI琼脂斜面上产酸和在LIA中呈阳性反应，或丙二酸盐肉汤试验呈阳性的培养物外，弃去乳糖试验阳性的非沙门氏菌培养物。为了证明他们是否为亚利桑那菌，需对这些培养物作进一步试验。

b.酚红蔗糖肉汤或紫色蔗糖肉汤。按上述五,7a-1所叙述的程序进行，除那些培养物在TSI琼脂斜面上产酸和在LIA中呈阳性反应者外，呈蔗糖试验阳性结果者皆作为非沙门氏菌弃去。

c. MR-VP肉汤.对每个未分类的TSI琼脂斜面上可疑沙门氏菌培养物，挑取少许，接种到此肉汤管中，置于35℃培养48±2h。

1) 在室温下按下述进行Voges-Proskauer氏(VP)试验：移取1mL48h培养物于试管中，并将剩余的MR-VP肉汤于35℃再培养48h。加入0.6mLα-萘酚溶液于试管中并振摇；加40%KOH溶液0.2mL，并振摇。为了加快反应速度，加少许肌酸结晶。4h后观察结果：阳性反应为整个培养基由粉红色转变至红宝石色。绝大多数沙门氏菌VP试验阴性，即整个肉汤不呈粉红至红色变化。

2) 甲基红试验：吸取经96h培养的MR-VP肉汤5mL于试管中，加入5-6滴甲基红指示剂，立即观察结果。绝大多数沙门氏菌培养物呈阳性结果，即培养基呈弥散性红色。明显的黄色为阴性结果。对KCN阳性，V-P试验阳性及甲基红试验为阴性培养物，皆可作为非沙门氏菌弃去。

d. Simmons氏枸橼酸盐琼脂. 从未分类的TSI琼脂斜面上，用接种针沾取培养 物，划线接种于枸橼酸盐琼脂斜面上，并穿刺底层。置于35℃培养96±2h，

按下述方法读取结果。

阳性反应：能生长，通常伴随颜色由绿色变兰色。大多数沙门氏菌培养物为枸橼酸盐阳性。 阴性反应：不生长或微弱生长，而且不变色。

8、培养物的分类：沙门氏菌培养物应具有表1反应模式。凡培养物具有表2所列任何一小项结果，为非沙门氏菌则弃去。对任何培养物，当不能按表1的分类表，明确地鉴定为非沙门氏菌属，或也不能根据表2所列试验反应从沙门氏菌属中排除者，可按Edwards和Ewings氏的“肠杆菌科鉴定”所述的补充试验进一步分类。如2个TSI培养物皆不能按生化试验证实分离物为沙门氏菌时，则对同一个25g检验样品中保留的尿素酶阴性TSI培养物，按五，5开始进行生化学试验。

FDA沙门氏菌检验标准中文版（三） 表1.沙门氏菌的生化和血清学反应 反应和底物 结果 沙门氏菌的反应(a) 阳性 阴性

1.葡萄糖(TSI) 黄色底部 红色底部 +

2.赖氨酸脱酸酶(LIA) 紫色底部 黄色底部 + 3.H2S(TSI和LIA) 黑色 无黑色 + 4.尿素酶 紫红色 无颜色变化 - 5.赖氨酸脱酸酶肉汤 紫色 黄色 +

6.苯酚红卫茅醇肉汤 黄色(产或不产气) 不产气或无颜色变化 +(b) 7.KCN肉汤 生长 不生长 -

8.丙二酸钠肉汤 蓝色 无颜色变化 -(c)

9.吲哚试验 溶液表面为紫色 溶液表面为黄色 - 10.多价鞭毛试验 凝集 不凝集 + 11.多价菌体试验 凝集 不凝集 +

12.苯酚红乳糖肉汤 黄色(产或不产气) 不产气；无颜色变化 -(c) 13.苯酚红蔗糖肉汤 黄色(产或不产气) 不产气；无颜色变化 - 14.V-P试验 粉色至红色 无颜色变化 - 15.甲基红试验 红色 黄色 +

16.西蒙氏枸橼酸盐 生长，蓝色 不生长，无颜色变化 v

a+， ≥90%阳性(1-2天内)；- ，≥90%阴性(1-2天内)；V，不稳定 b大部分亚利桑那沙门氏菌阴性 c大部分亚利桑那沙门氏菌阳性

表2.分离非沙门氏菌的关键特征 反应和底物 结果 1、尿素酶 2、吲哚

多价H血清实验 阳性（粉-红色） 阳性（粉-红色） 阴性（不凝集） 吲哚

Spicer-Edwards血清试验 阳性（粉-红色） 阴性（不凝集） 3赖氨酸脱羧酶