KCN肉汤 阴性(黄色) 阳性(生长)
4、苯酚红乳糖肉汤 阳性(黄色、有或没有气体)(a) 5、苯酚红蔗糖肉汤 阳性(黄色、有或没有气体)(a)(b) 6、KCN肉汤 V-P实验
中性红实验 阳性(生长) 阳性(粉-红色)
阴性(明显的黄色)
a 丙二酸钠阳性的培养物需进行进一步的实验确定是否是S.arzonae;
b 如果在LIA上有典型的沙门氏特征的培养物不要弃去,需进行进一步的实验,确定是否是沙门氏菌。
9. 沙门氏菌属的拟定性鉴定。使用5种商品化的生物化学试剂盒(API 20E, Enterotube II, Enterobacter aceae II, MICRO-ID,或Vitek GNI)中任一种,代替常规的生化管系统,鉴定拟定食源性沙门氏菌属。按本节鉴定所述,检验人员根据自己试验室选择商品试剂盒与生化管系统相适应的一种商品试剂盒。生化学商品试剂盒不能用来代替血清学试验(1)。组装试剂盒,配制试剂盒所需试剂。参照官方分析方法的978.24部分(API-20E, Enterotube II和Enterobacterlaceae II),989.12部分(MICRO-ID),和991.13部分(Vitek GNI),接种于每个组合,并按规定的时间与温度进行培养。加试剂,观察与记录结果。参照上述Ref.1把培养物拟定为沙门氏菌或非沙门氏菌属。
为证实拟定为沙门氏菌的培养物,尚需进行沙门氏菌菌体(O)血清学试验,按上述五,5;和沙门氏菌鞭毛(H)血清试验,按上述五,3;或进行Spicer-Edwards氏鞭毛(H)试验。并按下列原则对培养物进行分类:
a. 用商品化试剂盒拟定为沙门氏菌的培养物,若沙门氏菌菌体(O)血清学试验阳性与沙门氏菌鞭毛(H)血清学试验阳性的则报告为沙门氏菌。
b. 用商品化试剂盒确定为非沙门氏菌的培养物,参照AOAC标准(1)确定亦为非沙门氏菌,应作非沙门氏菌予以排除。
c. 凡不符合a或b的培养物,应按上述五,2-7项中有关规定作进一步试验,或按Ewing(2)氏的有关项目进一步试验,或送至标准定型实验室,做最后的血清定型与鉴定。
10. 鞭毛(H)试验阴性培养物的处理:对一些生化反应典型,被认为是沙门氏菌,但 鞭毛(H)试验阴性的培养物,可能是无动力的菌株,或鞭毛抗原发育不充分, 对此培养物的动力测定方法如下:从TSI斜面上挑取少量的培养物,接种于动力试验培养基平板中,在距平板边缘10mm处一次穿刺2-3mm深,不要刺到平板底或接种到其他任何部位。置于35℃培养24h。如果细菌游散生长至40mm或更远,按下述方法再试验:在游散生长最远处,用3mm接种环转种一环培养物至胰酪胨大豆蛋白胨肉汤中。重复沙门氏菌多价鞭毛(H)(按上述五,3)或作Spicer-Edwards氏鞭毛(H)血清学试验。如果培养物经第一个24h培养后无动力,于35℃培养24h;如果仍无动力,则置25℃再培养5天。如果上述试验仍为阴性,把该培养物定为无动力菌株。如果鞭毛(H)阴性培养物,按生化学反应可疑为沙门氏菌,应将培养物呈送微生物学实验室作进一步的鉴定和/或血清学分型。 11.血清学定型培养物递送。除非另有说明,每个检验样品要递送1个分离物。培养物要放在脑心浸液琼脂斜面的试管(13X100mm或16X125mm)内递送。试管的螺旋帽应拧紧以确保安全。试管标贴上样品编号,分析编号和密码。提交的每一个样品应有以下记录:1)收集报告 FD-464或进口报告FD-784;2)检测者的工作记录 FD-431;3)沙门氏菌的记录 FD-431g。放置培养物于培养容器内并加盖FDA印章封口,此培养物的记录(以上E-11)放在搬运箱内,
但不要放在加盖FDA印章的容器内。提交关于样品编号的申请或信函,以便早日出结果,按病原微生物的运输规定进行运输。依据联邦登记以最快的方式进行运输。对于提交的样品需保留一份拷贝。
沙门氏菌
沙门氏菌(Salmonella)
沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科,革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种(或菌株)。按其抗原成分,可分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌组。其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌,乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌,丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌,丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等。除伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引起人类的疾病外,大多数仅能目引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病,但有时也可污染人类的食物而引起食物中毒。沙门氏菌基本介绍 沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一,其病原沙门氏菌属肠道细菌科,包括那些引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外,还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌状态,也可表现为有临床症状的致死疾,它可能加重病态或死亡率,或者降低动物的繁殖生产力。
蛋、家禽和肉类产品是沙门氏菌病的主要传播媒介,感染主要取决于沙门氏菌的血清型和食用者的身体状况,受威胁最大的是小孩、老年人及免疫缺陷个体。根据国际惯例,要求对易受沙门氏菌污染的食品进行分类管理,以使大多数食物不含沙门氏菌,从而有效预防沙门氏菌病。为此,人们在探索沙门氏菌检测方法的过程中,作出了不
懈的努力,现将有关进展报告如下,并介绍两种快速检测沙门氏菌的试剂盒。沙门氏菌抗原构造与分类 o抗原
为脂多糖,性质稳定。能耐100℃达数小时,不被乙醇或0.1%石炭酸破坏。决定o型原特异性的是脂多糖中的多糖侧链部分,以1、2、3等阿拉伯数字表示。例如乙型副伤寒杆菌有4、5、12三个。鼠伤寒杆菌有1、4、5、12四个;猪霍乱杆菌有6、7二个。其中有些o抗原是几种菌所共有,如4、5为乙型副伤寒杆菌和鼠伤寒杆菌共有,将具有共同o抗原沙门氏菌归为一组,这样可将沙门杆氏菌属分为a~z、o51~o63、o65~o67共有42组。我国已发现26个菌组、161个血清型。使人类致病的沙门氏杆菌大多属于a~e组。o抗原刺激机体主要产生lgm抗体。 h抗原
为蛋白质,对热不稳定,60℃经15分钟或乙醇处理被破坏。具有鞭毛的细菌经甲醇液固定后,其o抗原全部被h抗原遮盖,而不能与相应抗o抗体反应。h抗原的特异性取决于多肽链上氨基酸的排列顺序和空间构型。
沙门氏杆菌的h抗原有两种,称为第1相和第2相。第1相特异性高,又称特异相,用a、b、c等表示,第2相特异性低,为数种沙门氏杆菌所共有,也称非特异相,用1、2、3等表示。具有第1相和第2相h抗原的细菌称为双相菌,仅有一相者称单相菌。每一组沙门氏杆菌根据h抗原不同,可进一步分种或型。h抗原刺激机体主要产生lgg抗体。
vi抗原
因与毒力有关而命名为vi抗原。由聚-n-乙酰-d-半乳糖胺糖醛酸组成。不稳定,经60℃加热、石碳酸处理或人工传代培养易破坏或丢失。新从患者标本中分离出的伤寒杆菌、丙型副伤寒杆菌等有此抗原。vi抗原存在于细菌表面,可阻止o抗原与其相应抗体的反应。vi抗原的抗原性弱。当体内菌存在时可产生一定量抗体;细菌被清除后,抗体也随之消失。故测定vi抗体有助于对伤寒带菌者的检出。伤寒沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌 两种生物如果在生物分类上被归入一个种,想必是非常亲近的了。伤寒沙门氏菌Salmonella Typhi和鼠伤寒沙门氏菌Salmonella Typhimurium这两个名字,看起来也够像的。不过,它们的行为大不相同,基因序列也没有那么像。 伤寒沙门氏菌只感染人类,损害肝、脾和骨髓,每年导致1600万人生病,60万人死掉,由于越来越多菌株具有抗药性,情况可能变得更糟。鼠伤寒沙门氏菌对生活环境不那么挑剔,几乎可感染一切地上走的或爬的活物,在人类身上造成的症状一般是食物中毒(爱吃生鸡蛋的人小心),听起来好像没有伤寒那么可怕,但一些科学家认为它的威胁更大,由此造成的食物中毒事件实际发生数目比报告数目可能多出30倍,每年有上亿人感染,死亡人数比伤寒沙门氏菌多出一倍,主要是婴幼儿和老人。
剑桥SANGER中心——还是这个中心,连项目的领导者也跟上面的鼠疫杆菌是同一人——从越南弄来了一种能够抵抗多种抗生素的伤寒沙门氏菌菌株。测序发现,它的基因组里有200多个假基因,它
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