带有目的基因的单链DNA配对。合成的寡核苷酸除短的错配区外，与目的基因完全互补。然后用DNA聚合酶使寡核苷酸引物延伸，完成单链DNA的复制。由此产生的双链DNA，一条链为野生型亲代链，另一条为突变型子代链。将获得的双链分子通过转导入宿主细胞，并筛选出突变体，其中基因已被定向修改。（2）、盒式诱变：是用一段人工合成具有突变序列的DNA片段，取代野生型基因中的相应序列。这就好像用各种不同的盒式磁带插入收录机中一样，故而称合成的片段为“盒”，这种诱变方式为盒式诱变。然而，并非所有变异区附近都能找到合适的限制位点，如果不存在限制位点，就要用寡核苷酸指导的定位诱变引入限制位点。（3）、PCR诱变：在最初所建立的PCR方法中就可看出只要引物带有错配碱基，便可使PCR产物的末端引入突变重组PCR进行定位诱变的方法，即可以在DNA片段的任意部位产生定位突变。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物，然后分别与5’引物和3’引物作PCR，这样得到的两个PCR产物分别带有变异碱基，并且彼此重叠，在重叠部位经重组PCR就能得到诱变的PCR产物。任何基因，只要两端及需要变异的部位的序列已知，就可用PCR诱变去改造基因的序列。方法简便易行，结果准确、高效，因此已成为最常用的定位诱变方法。
3. 影响微生物的生长和代谢的环境因子有哪些？
答：（1）温度；（2）水分及可给性；（3）氢离子浓度（pH）；（4）氧气和氧化还原电位；（5）辐射；（6）化学杀菌剂和抑制剂。
4. 何谓纯培养物的典型生长曲线？它可分为几期？有何实际指导作用？ 答：细菌纯培养系指只在单一种类存在的状态下所进行的生物培养。如将少量细菌纯培
养物接种入新鲜的液体培养基，在适宜的条件下培养，定期取样测定单位体积培养基中的菌体（细胞）数，可发现开始时群体生长缓慢，后逐渐加快，进入一个生长速率相对稳定的高速生长阶段，随着培养时间的延长，生长达到一定阶段后，生长速率又表现为逐渐降低的趋势，随后出现一个细胞数目相对稳定的阶段，最后转入细胞衰老死亡期。如用坐标法作图，以培养时间为横坐标，以计数获得的细胞数的对数为纵坐标，可得到一条定量描述液体培养基中微生物生长规律的实验曲线，该曲线则称为生长曲线，可划分为四个时期，即：延迟期、对数生长期、稳定期、衰亡期。微生物生长曲线可以用于指导微生物发酵工程中的工艺条件优化以获得最大的经济效益，对此举例说明。
5. “微生物对人类的重要性，你怎么强调都不过分。”试用具体事例来说明这句话的深刻意义。(7分)
答：在现代生物技术研究中，工具酶、载体、宿主等大都来自微生物，微生物在基因工
程、细胞工程、发酵工程、酶工程和生物反应器工程等方面具有重要作用。其中前两者的目的是获得工程菌或工程细胞株，后三者的目的是为工程菌或工程细胞株创造良好的生长繁殖条件，进行大规模扩增培养，以充分发挥其内在潜力，为人们提供巨大的经济效益和社会效益。对微生物在各个生物工程中的应用进行举例说明。
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