产品编号: CAT：RY8003
产品概述：本产品由ds cDNA和pGADT7-Rec （Smal-lineared）载体同源重组构建文库质粒，含有多个克隆位点和限制性内切酶，可用于酵母单杂、酵母双杂筛库，可以与诱饵载体共转化酵母菌株筛选相互作用蛋白。 载体信息：
保存条件：-30℃~ -15℃保存，运输条件：< 0℃。 实验流程:
用含有pGBKT7-诱饵质粒的AH109酵母菌株或pHIS2-启动子质粒的Y187菌株作为受体菌制备感受态，将文库质粒pGADT7-cDNA文库转入其中，涂相应的筛选平板。 1. 从SD-T平板挑取单菌种接于液体SD-T培养基50 ml，30℃，225 rpm，振荡培养24 h。 2. 转接于YPDA液体500 ml，使初始OD600=0.2，30℃，225 rpm，振荡培养4-5 h，至OD600=0.6。 3. 离心收菌，室温，4000 rpm，5 min。
4. 用30 ml无菌水重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。 5. 用20 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。 6. 用10 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清。
7. 向离心管中依次加入如下试剂，用枪头吹打混匀，或剧烈振荡1 min左右，至完全混匀。
50%PEG3350 1 M LiAc ssDNA (10 mg/ml) 文库质粒DNA
9.6 ml
8. 30℃水浴孵育，30 min。 9. 42℃水浴热激，25 min。 10. 30℃水浴复苏1 h。
11. 离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清，用6 ml无菌水重悬菌体，尽量温和地混匀，从中取20 ul培养物进行梯度稀释后涂SD-TL平板，用于检测文库转化效率，检测结果如下。其余涂三缺、四缺平板20块。 12. 30℃恒温培养3-5天，观察菌落生长。
13. 挑取长出的克隆单菌落，转接到相对应的筛选平板中继续培养3-5天。
1.44 ml
300 ul
25 ug
注意事项
1. 建议使用前分装质粒，防止质粒污染；
2. 如有用量要求，建议使用前测量质粒浓度，本公司提供的质粒浓度仅供参考。 技术支持
南京瑞源生物技术有限公司坐落于南京市栖霞区生命科技园，专注于基因组高通量研究领域，致力于生物高科技研发，目前产品的技术水平已达到省级实验水平，瑞源生物立足于生命科学，为基础研究领域科学工作者提供生物学技术服务，自2019年创立以来，全体员工致力于利用酵母系统研发新药物靶点，专注于生物学研究，长期与全国各大农林/医药院校在大型科研技术研发上紧密合作。
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