课时作业12 血红蛋白的提取和分离
1．以下关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述正确的是( )
A．红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的蒸馏水，重复洗涤3次
B．将血红蛋白溶液放在质量分数为0.9%的NaCl溶液中透析12小时 C．凝胶装填在色谱柱内要均匀，不能有气泡存在 D．蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的移动速度慢
解析：红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的生理盐水，重复洗涤3次目的是除去杂蛋白。透析时使用物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液，而不是用0.9%的NaCl溶液。蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较大的在凝胶外部移动，移动速度快。在装填凝胶柱时，不得有气泡存在，气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。
答案：C
2．有关透析的叙述中，错误的是( ) A．用于透析的薄膜要具有选择透过性 B．透析膜一般是用硝酸纤维素制成的
C．透析能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内 D．透析可用于更换样品的缓冲液
解析：透析袋一般是用硝酸纤维素(又称玻璃纸)制成的，它没有生物活性，故不具有选择透过性(活的生物膜才具有选择透过性)。透析袋能使小分子物质自由进出，而将大分子物质保留在袋内。透析可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液。
答案：A
3．在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是( ) A．防止血红蛋白被氧化
B．血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和 C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程
D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能
解析：利用磷酸缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于分离观察(红色)和研究(活性)。
答案：D
4．利用凝胶色谱法分离蛋白质时，蛋白质洗脱出来的顺序是( ) ①相对分子质量最大的 ②相对分子质量最小的 ③相对分子质量适中的 A．①②③ C．①③②
B．③②① D．②①③
解析：分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙的蛋白质洗脱出来的时间最短；分子大小适中，能进入凝胶内孔隙中孔径大小相应部分的蛋白质，洗脱出来的时间次之；分子很小，能进入分子筛全部内孔隙的蛋白质，洗脱出来的时间最长。
答案：C
5．凝胶柱的制作常用玻璃管，在选择玻璃管时应该考虑的因素有( ) ①玻璃管的高度 ③样品的体积 A．①②③ C．①②④
②玻璃管的直径
④缓冲溶液的pH B．②③④ D．①③④
解析：影响分离度的主要因素是层析柱的柱高，但在选择玻璃管时，也要考虑玻璃管的直径，保证柱高与直径的比为5∶1～10∶1。样品的体积也要考虑，缓冲溶液的pH不影响选择玻璃管。
答案：A
6．对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作不正确的是( ) A．加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐
B．让吸管管口沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面 C．打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱 D．待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5 mL收集一管，连续收集流出液
解析：打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口，在用同样的方法小心加入适量的20 mmol/L的磷酸缓冲液，然后连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱。
答案：C
7．在蛋白质的提取和分离中，关于对样品处理过程中，分析无误的是( ) A．洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐
B．洗涤时离心速度过小，时间过短，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果
C．洗涤过程选用0.1%的生理盐水
D．透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质
解析：洗涤红细胞的目的是去除血液中除血红蛋白以外的杂蛋白；洗涤时离心速度过大，时间过长，白细胞等会沉淀，达不到分离的效果；洗涤过程选用0.9%的生理盐水。
答案：D
8．下列有关蛋白质提取和分离的说法，错误的是( ) A．透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性 B．采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开来
C．离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离 D．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动
解析：电泳法分离物质的原理是在电场中，带电物质能向与自身所带电荷相反的电极方向移动，移动的速度和距离取决于物质所带电荷的量及相对分子质量。
答案：D
9．SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是( ) A．增大蛋白质的相对分子质量 B．改变蛋白质分子的形状
C．掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别 D．减少蛋白质分子的相对分子质量
解析：SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二、三级结构。在样品和凝胶中加入还原剂SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白质—SDS复合物，所带的负电荷大大超过了蛋白质原有的电荷量，这样就消除了不同种蛋白质分子间的电荷差异和结构差异从而达到仅根据蛋白质相对分子质量亚基的不同而分离蛋白质的目的。
答案：C
10．下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入(图Ⅰ) 和洗脱(图Ⅱ)示意图，请据图回答下列问题。
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