革兰染色法（传统法）竞赛试卷 竞赛时间： 15分钟
一、说明
1．本题满分100分，完成时间15分钟。 2．要求独立完成，不得相互询问或讨论。
3．考核成绩为操作过程评分、操作结果评分和考核时间评分之和。 4．全部操作过程时间和操作后处理时间计入时间限额。 二、实验原理
G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。
G- 菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄或稀释石碳酸复红复染后呈红色。
三、实验器材
载玻片、特种铅笔、接种环、酒精灯、打火机、生理盐水、吸水纸、冲洗瓶、钟表、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯、染色盘、染色架、消毒液等。(学生准备黑体字部分的器材) 四、实验试剂
革兰染液（杭州天和微生物试剂有限公司）：结晶紫染液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复染液。(学生准备黑体字部分的器材) 五、实验标本 平皿细菌培养物 六、操作步骤
1.涂片 用灭菌接种环挑取菌落与载玻片上预先滴加的生理盐水涂布成1cm2或蚕豆大小的半透明菌膜。
2.干燥 涂片制成后，在空气中使其迅速干燥，以免细菌皱缩变形（若需加快干燥速度，将涂布面朝上，置于火焰上方慢慢烘干，切勿紧贴火焰）。
3.固定 玻片干燥后火焰加热法固定，即中速通过火焰3次进行固定，以玻片反面接触手背皮肤，热而不烫为宜。
4.初染 加结晶紫染液染1min，细流水冲洗，并倒去玻片上积水。 5.媒染 加碘液染1min，细流水冲洗。
6.脱色 加脱色液，不时摇动10~30s，至无紫色逸出为止，细流水冲洗。 7.复染 加复染液，染1min，细流水冲洗。
8.镜检 待已染色的细菌标本自然干燥或用吸水纸吸干后，再用显微镜进行观察。
选手编号：_____工位号： 标本号： 比赛日期：2015年 月 日 午 时 分
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七、染色结果
菌体颜色 菌体形状 菌体G＋或G- 染色色彩是否清晰
裁判签名确认 八、报告
（如：找到革兰阳性球（杆）菌或找到革兰阴性球（杆）菌）
参赛学生填写 （学生不填） 复核裁判确认 裁判签名确认
选手编号：_____工位号： 标本号： 比赛日期：2015年 月 日 午 时 分
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第二届全国卫生职业院校检验技能竞赛 革兰染色（传统法）评分表
序号 项目 考核内容 报告参赛项目及序号，语言流畅 着白大衣、帽、口罩、手套并按要求佩戴参赛签 分值 漏缺一项 扣分标准 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 1 2 2 1 2 1 1 1 1 扣分 得分 着装不整、漏缺某一项 5 仪容、着装不整 工作台面凌乱、漏缺某一项 摆放染液顺序错误 1 1 1 未编号 不正确点燃酒精灯 未观察菌落 违反无菌操作 接种环使用不规范、灭菌不当 1 准备工作 仪表端庄、头发符合要求 选择并合理摆放实验器材、试剂及标本 按正确顺序摆放染液 2 3 编号 选择玻片并正确编号 点酒精灯 先提灯芯排气后点灯 观察菌落 无菌操作挑取细菌涂片 4 制片 6 未加生理盐水 菌落选择不当 接种环未冷却取菌 涂片不均匀、过厚、过大或过小 干燥 固定 熄灭酒精灯 1 1 1 涂片未完全干燥或过热 标本片不按要求通过酒精灯火焰，未试热 未及时熄灭酒精灯或方法不正确 顺序错误 漏缺某一步骤染色 5 染色 ①按顺序染色 ②加第一染液 ③染色一定时间 ④细小流水缓慢冲洗染液 ⑤加第二染液，依此类推，染完第四染液，冲洗干净 ⑥干燥 染色液过多 染液未盖住细菌涂片 15 染色时间过长或过短 脱色时间过长 先倒染液后冲水 冲水过大、过快 冲洗不干净 染色片未完全干燥 6 使用显微正确取显微镜 5 取显微镜不正确
镜 正确使用低倍镜找视野 正确使用油镜找到细菌并报告 熟练油镜使用 正确擦拭油镜头 描述菌体颜色正确 描述菌体形态正确 未用低倍镜找视野 找不到细菌 使用油镜不当，压坏玻片 未擦拭或方法不当 描述菌体颜色错误 描述菌体形态错误 30 指认菌体G或G错误 红色、紫色不清晰 报告错误或报告正确但与染色结果描述不一致 不清理工作台、物品没按要求放到指定位置、未倒废液、未用消毒液擦拭桌面 用过的一次性物品未放入污物缸 损坏器材 划伤手和标本外溢等 实验后未消毒手 2 从生物安全，规范操作，完成质量等方面考虑 每超时1分钟 ，倒扣2分 ＋-1 1 1 1 5 10 10 5 26 1 7 结果 指认菌体G或G正确 染色色彩清晰 ＋-8 报告 正确报告找到革兰阳性球（杆）26 菌或找到革兰阴性球（杆）菌 操作结束清理工作台、物品放到指定位置、倒废液、用消毒液擦拭桌面（标本片放标本盒内） 将使用过的一次性物品弃入污物缸或指定位置 注意保护器材 注意生物安全防护 实验后消毒手 1 1 1 1 2 9 文明操作 5 10 11 12
总体印象 安全，规范，流畅，完成质量好 不延时，超过规定时间5分钟，完成时间 终止比赛 合计 100 现场裁判签名： 结果评分裁判签名：
复核裁判签名： 现场裁判长签名：
选手编号：_____工位号： 标本号： 比赛日期：2015年 月 日 午 时 分
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第二届全国卫生职业院校检验技能竞赛 血糖测定（葡萄糖氧化酶偶联法）竞赛试卷
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