第八章 蛋白质功能研究1 - 图文 

应用

1）分离鉴定与特异DNA序列结合作用的蛋白质并获得其编码基因

2）在细胞内分析鉴定转录因子与顺式元件结合的有效性??，确定已知DNA-蛋白质之间是否存在相互作用。

②酵母三杂交系统(Yeast Three-hybrid system)

?原理：蛋白X与Y的相互作用通过第三个分子蛋白Z的

参与实现

?目的：研究两个蛋白质与第三个成分间的相互作用，可以是蛋白质、RNA 或小分子药物

?三杂交系统需要满足的条件 ? 第1、2个融合蛋白必须通过与成分3的结合，间接起到激活报道基因转录的作用，两者间没有直接作用，不能直接激活报告基因的转录； ? 成分3具有分别与第1，2个融合蛋白结合的区域. 应用 ?为以前局限于方法得不到解决的问题带来希望。例如，细胞因子融合蛋白除提高原有的生物活性外，同时具有新增加的生物活性，但其机理不明。有的认为是细胞因子融合蛋白分别与各自的受体结合；有的认为是细胞因子融合蛋白与各自受体外 的新型受体结合激活该受体引起级联反应所致。酵母三杂交系统的出现为探索这一机理提供了可 能. ③反向双杂交系统（Reverse two hybrid system）

反选择筛选策略，提供了简便的鉴定阻断蛋白间相互作用的方法。反向酵母双杂交系统的关键是掺入一种表达产物对细胞生长有毒的报导基因， 用于监测蛋白间的相互作用。

?模型： URA3编码的酶是尿嘧啶合成的关键酶，该

酶能把5-氟乳清酸(5-FOA)转化成对细胞有毒的物质。