T-DNA片段(内部) (4)双子叶植物 单子叶植物 (5)显微注射技术 Ca处理法 解析 将目的基因导入受体细胞的方法多种多样，应根据受体细胞的类型和目的基因的特点分别采用相应的方法。农杆菌转化法适于将目的基因导入植物细胞，而显微注射技术和Ca
＋
2
2＋
处理法分别适于将目的基因导入动物细胞和微生物细胞。
23.(10分)下面是口蹄疫疫苗生产过程示意图，请据图回答下列问题：
(1)首先从口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的
RNA
控制合成的病毒蛋白质，具有
________________________________________________________________________ 特性，又不会使动物致病。以合成病毒蛋白的RNA产生病毒蛋白的DNA，需用到的工具酶是________________________________________________________________________。 (2)构建基因表达载体所需要的工具酶是___________________________________________ ________________________________。基因表达载体除目的基因外，还应包括________________________________________________________________________ __________________。
(3)导入大肠杆菌前需先将大肠杆菌处理为__________________________________ 细胞。
(4)为检测目的基因是否导入受体细胞，常常要借助载体上_______________________________________________________的表达，更准确的方法是利 用放射性同位素标记的______________作探针与基因组DNA杂交。最后还要检测目的基因是否翻译成了病毒蛋白质，利用的技术是______________________。
答案 (1)抗原 逆(反)转录酶 (2)限制性核酸内切酶和DNA连接酶 启动子、终止子、标记基因 (3)感受态 (4)标记基因 病毒蛋白基因(目的基因) 抗原—抗体杂交技术 解析 (1)病毒由核酸和蛋白质组成，其蛋白质外壳具有免疫特性，故口蹄疫疫苗生产过程只需提取口蹄疫病毒中控制合成病毒蛋白的RNA部分。以RNA为模板合成DNA的过程属于反转录，需要逆(反)转录酶。(2)基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因等。构建基因表达载体一般用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口，再用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端。将切下的目的基因片段，插入质粒的切口处，在DNA连接酶的作用下使质粒与目的基因结合形成重组质粒。(3)将目的基因导入微生物细胞前，常用Ca处理使其成为感受态细胞。(4)标记基因的表达可检测目的基因是
2＋
否导入受体细胞，除此之外还可以用DNA杂交法和抗原—抗体杂交技术进行检测。 24.(10分)科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内表达成功。请据图回答下列问题：
(1)图中①DNA是以________________为模板，____________形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的基因。
(2)图中②代表的是__________________，在它的作用下将质粒(______________DNA)切出________末端。
(3)图中④表示将____________________。⑤表示____________随大肠杆菌的繁殖而进行________________________________________________________________________。 (4)采用蛋白质工程可以对胰岛素进行改造，使之起效时间缩短，保证餐后血糖高峰和血液中胰岛素高峰一致。如果你是科研工作者，请写出研制速效胰岛素的思路。 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (5)下列关于蛋白质工程的说法，不正确的是( )
A.蛋白质工程能将人抗体某些区段替代鼠单克隆抗体的区段，降低鼠单克隆抗体免疫原性 B.蛋白质工程可对酶的催化活性、底物专一性、抗氧化性、热变性、碱变性等加以改变 C.理论上通过对关键氨基酸的转换与增删是进行蛋白质工程的唯一方法 D.蛋白质工程的崛起主要是工业生产和基础理论研究的需要 答案 (1)原胰岛素mRNA 反转录 (2)特定的限制性核酸内切酶 环状 黏性 (3)目的基因导入受体细胞 重组DNA 扩增
(4)预期蛋白质的功能→蛋白质应有的高级结构→蛋白质应具备的折叠状态→推测应有的氨基酸序列→应有的脱氧核苷酸序列 (5)C
解析 蛋白质工程的类型主要有两种：一是从头设计，即完全按照人的意愿设计合成蛋白质。从头设计是蛋白质工程中最有意义，也是最困难的操作类型，目前技术尚不成熟，但理论上
可行。二是定位突变与局部修饰，即在已有蛋白质基础上，只进行局部的修饰。通过造成一个或几个碱基定位突变，以达到修饰蛋白质分子结构的目的。“从头设计”的方法：预期蛋白质的功能→蛋白质应有的高级结构→蛋白质应具备的折叠状态→推测应有的氨基酸序列→应有的脱氧核苷酸序列，可以创造自然界不存在的蛋白质。蛋白质工程的崛起是因为天然蛋白质不能满足人类的需求，例如多数酶虽然在自然状态下有活性，但在工业生产中没有活性或活性很低。
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