5．中性甲醛溶液
50ml甲醛溶液，加约3ml0.5%酚酞指示剂，滴加o.1mol/LNaOH溶液，使溶液成微粉红色，临用前配制。
五、操作
取3只锥形瓶，编以1、2、3号。于1、2号瓶中各加甘氨酸溶液2.0ml及水5.0ml； 于3号瓶中加水7.0ml。然后3只锥形瓶中各加入甲醛溶液5.0ml,0.05%溴麝香草酚蓝溶 液两滴及0.5%酚酞酒精溶液4滴。再用标准0.1mol/LNaOH溶液，滴定至紫色(pH0.7-9.0)。则每ml氨基酸溶液中含氨基氮的mg数为：
氨基氮（mg/ml）=
(A?B)?1.4008
2注：A——滴定样品消耗NaOH溶液的ml数
B——滴定空白消耗NaOH溶液的ml数
1.4008——1ml0.1mol/LNaOH溶液相当的氮mg
实验四 氨基酸纸层析法
一、目的
通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。
二、原理
用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法。纸层析所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成。滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的称上行法；由上向下移动的称下行法。将样品点在滤纸上（此点称原点），进行展层，样品中氨基酸在两相中不断迸行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是将氨基酸分离开来。形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。在一定条件下，某种物质的Rf值是常数。
本实验采用纸层析法分离氨基酸。氨基酸是无色的，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。
三、器材
1．氨基酸溶液：缬氨酸、组氨酸、亮氨酸和谷氨酸溶液及它们的混合液，各组分浓度
均为0.5％。
2．层析缸
3．层析滤纸（新华1号） 4．毛细管 5．吹风机 6．烘箱 7．喷雾器 8．刻度尺 9．铅笔 10．表面皿
四、试剂
1．展层剂：
正丁醇：甲酸：水＝15：3：2（V／V） 2．显色剂：
0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，即得0.5％茚三酮一无水丙酮溶液，贮于棕色瓶中备用。
五、操作
1．标记：
取层析滤纸（22×14cm）一张。在纸的一端距边缘2～3cm处用铅笔划一直线，在直线上每间隔2cm做一记号，标出5个原点。
2．点样：
用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，点子直径不超过3mm,边点样边用电吹风吹干。
3．展层：
将点好样滤纸放入装于展层剂的层析缸内，展层剂必须在点于下方。盖层析缸。待溶剂上升至15～20cm，用铅笔描出溶剂前沿界线，把滤纸放于表面皿上，于烘箱内105℃15min烘干。
4．显色：
用喷雾器均匀喷上显色剂后于烘箱内100℃5min，即可显出个层析斑点。 5．计算各种氨基酸的Rf值。
实验五 酵母核糖核酸的提取及组分鉴定
一、目的
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、原理
酵母核酸中RNA含量较多，DNA少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，加入乙醇可使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA粗制品。
三、器材
1．干酵母粉 2．天平 3．烧杯 4．抽滤瓶 5．布氏漏斗 6．移液管 7．玻棒 8．pH试纸 9．离心机
四、试剂
1．0.2%NaOH溶液 2．乙酸（A.R） 3．95%乙醇
4．无水乙醚（C.P） 5．氨水（C.P） 6．10％H2SO4溶液 7．5％AgNO3溶液：
5g AgNO3溶于蒸馏水，定容至l00ml，贮于棕色瓶中。 8．苔黑酚一三氯化铁试剂 9．定磷试剂
五、操作
１．RNA的提取
称取４g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴中加热30min并经常搅拌。加数滴乙酸，使提取液呈酸性。4000r/min离心10～15min ，取上清夜，边搅边搅拌边加入95%乙醇洗涤两次，无水乙醚洗两次后，将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤，干燥后即得粗RNA。
２．鉴定：
取上述粗RNA0.5g，加10%H2SO4溶液5ml，加热至沸1～2min，制得RNA水解液。 （１）嘌呤碱：
取水解液2ml，加氨水2ml，5％NaOH溶液，观察是否产生絮状嘌呤碱的银化合物。 （２）核糖：
取水解液0.５ml，加苔黑酚-FeCI3；试剂1ml，加热至沸1min，观察颜色变化。 （３）磷酸：
取水解液1ml，加定磷试剂1ml，水浴上加热，观察溶液是否变成蓝色。
实验六 蒽酮比色定糖法
一、目的
掌握蒽酮比色定糖法的原理及方法。
二、原理
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己醛糖酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。蒽酮可与其它一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存在有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。本法是一种快速而简便的定糖方法，多用于测定糖原含量，亦可用于测定可溶性糖含量。
三、器材
l．移液管 2．刻度试管 3．水浴锅 4．冰浴锅
5．72型分光光度计
四、试剂
1．无蛋白糖类溶液： 2．蒽酮试剂
2g蒽酮溶于1000ml80%(v/v)硫酸中，现配现用。 3．标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）
100mg糖原溶于蒸馏水定容至1000ml。
五、操作
1．制作标准曲线
取6支试管编号，依次加入标准糖溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，均用蒸馏水补足至l.0ml。置水浴中5min，各加蒽酮试剂4ml，沸水浴中准确煮沸10min，自来水冷却，室温放置10min后，比色测定光密度OD620，并以此为纵坐标，糖含量为横坐标，绘制标准曲线。
2．样品含量测定
吸取1ml无蛋白糖类溶液于试管中，水浴冷却，加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，自来水冷却，静置10min后比色测OD620，并由标准曲线上查出样品液糖含量。
3．计算：
实验七 酶的特性
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