一、目的
加深对酶性质的认识。
二、内容
（－）温度对酶活力的影响 1．原理：
酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最快。大多数动物酶的最适温度为37～40℃，植物酶的最适温度为50～60℃。酶对温度的稳定性与酶的存在形式有关。有的酶的干燥制剂，虽加热到100℃，其活性并无明显改变，但在100℃溶液中却很快宪全失活。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。
2．器材
〈1〉试管及试管架 〈2〉恒温水浴 〈3〉冰浴 〈4〉沸水浴 3．试剂
〈1〉0.2%淀粉的0.3%氯化钠溶液：现配现用 〈2〉稀释200倍的唾液
用蒸馏水漱口，以清涂食物残渣，再含一口蒸馏水，半分种后使其流入量筒并稀释200倍，混匀备用。
〈3〉碘化钾-碘溶液
20g碘化钾和10g碘溶于100ml水中，用前稀释10倍。 4．操作方法
淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色,麦芽糖遇碘也不呈颜色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
取3支试管编号，分别加入1ml淀粉溶液，1、2号管中各加入稀释唾液1ml，3号管中为煮沸过的唾液1ml摇匀。将1、3号两试管放入37℃恒温水浴，2号管放入冰水中，10min后取出，将2号管内液体分为两份，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，记录并解释所得结果。将2号管剩余的一半溶液放入37℃ 水浴中继续保温10min后，用碘液检验，记录结果。 （二）pH对酶活性的影响
1．原理
酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适pH值不同。如唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。但酶的最适pH受底物和缓冲液性质的影响。
2．器材
〈1〉试管及试管架 〈2〉移液管 〈3）滴管 〈4〉锥形瓶 〈5〉恒温水浴 3．试剂
〈1〉新配制的溶于0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液
〈2〉稀释200倍的新鲜唾液 〈3〉溶液
〈4〉柠檬酸溶液 〈5〉碘化钾-碘溶液 〈6〉pH试纸
pH分别为5.0、5.8、6.8、8.0四种 4．操作 锥形瓶号码 1 2 3 4 0.2mol/LNa2HPO4 (ml) 5.15 6.05 7.72 9.72 0.1mol/L 柠檬酸 (ml) 4.85 3.95 2.28 0.28 pH 5.0 5.8 6.8 8.0 取4个锥形瓶编号，按表吸取试剂，配成pH5.0~8.0的四种缓冲溶液。从四个锥形瓶中各取缓冲液3ml，分别注入4支编号拭管，随后每管加入0.5%淀粉溶液2ml和稀释200倍的唾液2ml，向各试管加人稀释唾液时间间隔为1min，将各试管内容物混匀，并依次置于37℃。水浴中保温。
第4管加入唾液2min后，每隔1min从第3管中取出1滴混合液，置于白瓷板上，加一小滴碘化钾-碘溶液检验淀粉水解的程度。待混合液变成棕黄色时，向所有试管依次添加1~2滴碘化钾-碘溶液。添加溶液的时间间隔，从第一管起也为1min。观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。 （三）唾液淀粉酶的激活和抑制
1.原理：
酶的活性受某些物质的影响，能使酶活性增加的物质称酶的激活剂，使酶活性降低的物质称酶的抑制剂，如氯离子是唾液淀粉酶的激活剂，铜离子是其抑制剂。
2.器材：
〈1〉恒温水浴 〈2〉试管及试管架 3.试剂
〈1〉0.1%淀粉溶液
〈2〉稀释200倍新鲜唾液 〈3〉l％NaCl溶液 〈4〉l％CuSO4溶液 〈5〉l％Na2SO4溶液 〈6〉碘化钾-碘溶液 4.操作
取4支试管编号，分别加入0.1％淀粉溶液l.5ml和稀释唾液0.5ml后，第1管加1％CuSO4溶液0.5ml，第2管加1％NaCl溶液0.5ml，第3管加1％Na2SO4溶液0.5ml，第4管加热蒸馏水0.5ml，摇匀，置于37℃水浴保温10min后，分别加人2~3滴碘化钾-碘溶液。记录结果并解释之，说明第3管的意义。 （四）酶的专一性
1.原理
酶具有高度的专一性。本试验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不
能催化蔗糖的水解，而蔗糖酶催化蔗糖产生还原性葡萄糖和果搪，但不能催化淀粉的水解。用Benedict试剂检验糖的还原性。
2.器材：
〈1〉恒温水浴 〈2〉沸水浴
〈3〉试管及试管架 3.试剂：
〈1〉2%蔗糖溶液
〈2〉稀释200倍的新鲜唾液
〈3〉新配制溶于0.3％NaCl的1%淀粉溶液 〈4〉蔗糖酶溶液
将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤2~3次（离心法）后，3置于滤纸上自然干燥。取干酵母100g放于研钵中，加适量蒸馏水和少量细沙，用力研磨，提取约1h,再加蒸馏水使总体积达原体积10倍，离心，上清夜保存于冰箱备用。
〈5〉Benedict试剂
无水硫酸铜1.74g溶于100ml热水中，冷却后稀释至150ml。取柠檬酸钠173g，无水碳酸钠100g和600ml水共热，溶解后冷却并加水至850ml，再将冷却的150ml硫酸铜溶液倾入。本试剂可长期保存。
4.操作：
〈1〉淀粉酶的专一性 管号 0.1%淀粉溶液 （ml） 2%蔗糖溶液 （ml） 稀释唾液 (ml) 煮沸过的稀释唾唾液(ml) 蒸馏水(ml) 1 1 / / / 1 2 / 1 / / 1 3 1 1 1 / / 4 / / 1 / / 5 1 1 / 1 / 6 / / 1 1 / 取6支试管编号，按上表加入试剂后，置于37℃水浴15min，各加人Benedict试剂1ml，沸水浴中2~3min后，观察现象并解释之。
〈2）蔗糖酶的专一性
取6支试管编号，测定方法与测定淀粉酶专一性基本相同，只是将所加试剂改为蔗糖酶溶液，煮沸过的稀释唾液改为煮沸过的蔗糖酶溶液，在37℃水浴中时间为15min减少为5min，其余均相同，记录结果并解释之。
实验八 维生素C的定量测定
一、目的
1．学习定量测定维生素的原理和方法。 2．进一步掌握滴定法的基本操作技术。
二、原理
维生素C是人营养中最重要的维生素之一，缺乏会引起坏血病，因此又称为抗坏血酸。维生素C为水溶性维生素，具有很强的还原性。在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，抗坏血酸易被氧化而破坏。在中性或酸性环境中，能将染料2，6-二氯靛酚还原成无色的还原型2，6-二氯靛酚，同时抗坏血酸被氧化成脱氢抗坏血酸。2，6-二氯靛酚在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，因此可在酸性条件下用其滴定样品还原型抗坏血酸，溶液A无色转变为微红时即为滴定终点。根据染料的滴定可折算出样品中抗坏血酸的含量。
三、器材
l．松针、新鲜蔬菜和新鲜水果 2．台式天平 3．移液管 4．研钵 5．漏斗 6．锥形瓶
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