第39章 基因工程及蛋白质工程 - 图文

除建立cDNA 文库以外，对于一些高丰度表达、容易纯化的蛋白质，可以直接通过该蛋白质的单克隆抗体纯化该基因的核糖体，再分离该蛋白质的特异mRNA，直接反转录成cDNA，进行基因克隆，从而直接获得该特定基因的克隆，这是用染色体DNA 难以达到的克隆效果。

4．人工体外合成DNA 片段

随着体外合成DNA 的技术日渐完善，合成DNA 的长度不断加长。一些小分子生物活性多肽，可以通过人工合成编码顺序插入载体后，转化细菌进行表达。分子较大的基因，可以通过分段合成，然后连接组装成完整的基因。目前已经合成了人胰岛素A、B 链基因和干扰素基因，并成功表达，制备成商业产品。

5．聚合酶链反应（PCR）扩增特定基因片段 对于有部分了解或完全清楚的基因，可以通过PCR 反应，直接从染色体DNA 或cDNA 上高效快速地扩增出目的基因片段，然后进行克隆操作。唯一的要求是，对基因片段两侧的序列了解清楚。

二．基因文库的构建

克隆数目的估算公式为：N=ln(1-p)/ln(1-f)。P：任意基因存在于文库中的概率；f：克隆DNA(bp)占基因组(bp)的分数。

三．cDNA 文库的构建

真核mRNA 的分离：

逆转录合成cDNA：