微生物量碳氮测定方法

微生物量碳氮测定（赵宁宁版）

氯仿熏蒸提取法CFE（Chloroform fumigations extractions-Method）

Literature:

Brookes PC, Landman A, Pruden G, Jenkinson DS (1985). Chloroform fumigation and the release of soil nitrogen: Arapid direct extraction method to measure microbial biomass nitrogen in soil. Soil Biology & Biochemistry 17: 837-842.

试剂处理：

1. 氯仿必须是除去乙醇的，乙醇除去方法是先加入约200l的氯仿至1L的分液漏斗中，然

后用5% v/v H2SO4溶液20ml洗涤两次，每次手摇动2-3min左右。之后在用蒸馏水洗涤2-3次，然后加入5g左右的无水硫酸镁或者无水氯化钙干燥，最后使用旋转蒸发仪蒸馏。 2. 沸石处理：玻璃珠事先用丙酮洗净，然后在105度下烘干。使用清洗烘干后的玻璃珠，

否则氯仿有可能不会沸腾。

上述处理均在通风橱里操作。

3. 检查真空干燥器的气密性，事先使用真空泵抽取真空，待一天后轻微打开干燥器的开关，

听到是否有呲呲的声音。若是气密性不好，使用少些凡士林密封。

步骤：

1. 鲜土样过2mm筛子后，在40C冷藏室贮藏。

2. 在熏蒸提取之前，测定土壤重量含水量，之后用蒸馏水调节土壤水分含量至统一（一般

是调节到土壤的最大持水量或者调节至土壤样品中含水量最高值），这是为了保证熏蒸效果一致。

3. 称取15g新鲜土样到50ml的小烧杯中（标签要用铅笔记录）。 4. 将氯仿，真空干燥器事先放入通风橱中（氯仿有毒），在真空干燥器底部放入平底100ml

或者200ml烧杯，烧杯中加入用丙酮洗净烘干的玻璃珠至小半杯即可，然后加入处理完毕的氯仿至2/3左右。

5. 使用瓷板将底部放有氯仿的烧杯与样品隔开，放入土壤样品后，盖上真空干燥器的盖子

然后使用泵抽取真空，氯仿应该是持续出现小气泡即可。注意：防止氯仿爆沸，最好使用可以调节吸力的泵。使用泵抽取至少10分钟，后面几分钟不会小气泡，为正常情况。最后在关上真空干燥器，然后放在室温下熏蒸至少一天以上。简单来说，土壤含有越高的土壤粘质，熏蒸时间越长，最好在3-4天左右。

6. 熏蒸完成后，在通风橱中取出底部的氯仿烧杯，之后再将土壤放入真空干燥器内，用泵

抽取3次，每次30min，除去土壤中残留的氯仿。 7. 熏蒸完全后的前一天，提取未熏蒸的土壤微生物量碳氮，浸提步骤如下面熏蒸浸提步骤。

熏蒸的土壤尽可能全部的转移到100ml的速率瓶中；或者50ml的离心管中。（在德国是使用离心管，因为需要先离心，然后在用滤纸过滤，滤纸为50um的孔径。先用30ml的0.5M的K2SO4提取，然后震荡1h，在4000rpm下离心15min，然后过滤，上清液必须清澈。再加入20ml的0.5M的K2SO4溶液，事先摇开离心管的土壤，之后震荡，离心，过滤。最后得到45ml左右的提取液）。

8. 将提取好的滤液贮藏在-22度。

9. 测定之前一晚，放在室温下解冻，然后使用超声波震荡去除溶液中的气泡和K2SO4颗

粒，然后稀释10或者20倍。 10. 上机测出相应指标浓度。 计算：

微生物量碳氮计算是用熏蒸，乘以提取液和稀释倍数，除去提取土壤的干土重之后减去未熏蒸提取液乘以提取液和稀释倍数，除去提取土壤的干土重。计算系数是微生物量碳使用0.45，微生物量氮使用0.54。